工業制備色譜系統報價誠信企業推薦「創新通恒」

如何用制備色譜柱制備低含量的雜質？

制備色譜柱為ZorbaxSB-C18 9.4*250mm及gilson餾分收集器，色譜儀為Agilent1100或LC-6A。想用其制備面積歸一化法含量為0.05%左右的雜質，初步提純后用高分辨的LC-MS進行定性分析。如何設定色譜條件，如，流量、進樣量、樣品的濃度、切割點的設置、是否要濃縮，要求將95%以上的主峰切除。

（主峰后有二個雜質靠得很近。）

答：

1.制備用的流動相盡量等級高一點，否則流動相中的雜質會影響LC-MS分析。

2.使用餾分收集器時，延遲體積一定要計算準確，檢測器的響應時間設到很小，否則都會影響收集的純度和回收率。制備柱的流速一般與直徑的平方成正比，如果4.6mm分析柱流速為1mL/min，9.4mm制備柱用1*（9.4/4.6）2,大約為4mL/min。進樣量設到幾個mg應該基本沒有過載。進樣樣品濃度越高越好。假如進樣10mg，理論計算0.05%的雜質大約只有5μg，顯然濃度太低，盡量是多做幾次，合并餾分然后濃縮后做LC-MS分析。

樣品如果溶解度太低如何上制備HPLC？

（1）了解一下樣品的性質,根據其酸堿性,極性等性質，通過調節溶劑的pH值等,以達到較好的溶解度。

（2）樣品可能某種晶型難溶，這樣可以加入其他溶劑以助溶。

（3）不是一定要用流動相來溶解樣品，對溶解度差的樣品，可以選擇甲醇，THF或DMSO等溶解樣品。特別是DMSO，對一般的化合物溶解度都很好。并且在反相柱上不保留，不會造成干擾。而且DMSO的洗脫能力很弱，一般不會影響峰型。

（4）可以固體上樣。

備型柱子柱壓上升，柱效下降，怎么辦？

對高的價值的制備柱來講，延長柱子壽命是很重要的。一般要注意保護柱子，一般來說，制備柱子一般需要保護柱配套。

下面是可能堵塞柱子的原因：

（1）如果您所分離的樣品中雜質較多而您在上樣前沒有經過過濾（0.45微米），一些顆粒性雜質會積聚在柱頭造成柱壓升高。

（2）也有可能是因為您所使用的流動向中含有緩沖鹽的原因，結晶或發生化學變化而堵塞。可以把柱子沖一沖。

（3）流動相是否符合液相色譜的要求？是否過濾處理？

制備色譜的填充

填料是工業制備色譜的血脈，填料的選擇和利用是非常關鍵的，目前已有越來越多的產品應用到IPC中。填料的化學性質和物理性質決定了色譜的分離性能和動力學性能。應用于大規模工業化制備色譜中的填料具有如下特殊的要求。　　

1、機械強度高：填料需要承受很大的機械壓力，因為填料在IPC使用中，需要經常裝卸，機械性能差的填料經受不住反復填充，它們易破碎，產生細顆粒，降低柱滲透性，甚至堵塞濾片，造成流速分布不均勻，影響分離產物的純度，在系統中產生極高的柱壓而無法繼續使用引。　　

2、負載量大：在IPC中，填料的負載量越大，則單位體質量填料可處理的原料量就可增加，因而提高了產率。選擇合適孔徑及孔徑分布的填料是獲得高負載量的一個關鍵因素。　　

3、可大量供應，批間的重現性好：制備色譜工藝過程要擴大，必須有可靠的供貨源提供大量填料，否則無法實現工業化。填料各批量之間的化學和機械穩定性、孔結構及可重復的比表面積等必須具有高度的重現性，否則難以保證長期、持續、穩定的分離與純化生產工藝。　　

4、合適的顆粒大小和窄的粒度分布范圍：細顆粒可增加塔板數及分辨率，但同時引起裝柱困難，需要更高的操作壓力。