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發布時間:2020-11-12 06:36  
低溫生物菌種的防護方法有哪些?
主要的方法是:①用添加劑和速凍,以防止冰晶的形成,即使形成,也是微小的冰晶,不致引起機械損傷。常用的添加劑是甘油和某些多元醇類化合物如甘醇等,其作用是使水不易結冰。速凍是將生物體在很短時間內,立即降至液態氮的溫度(約為-195℃),使水迅速凝固,以避免形成冰晶。只用添加劑不能完全防止結冰;單靠速凍雖能避免在降溫時形成較大的冰晶,卻不能避免在溫度回升時形成較大冰晶。只有兩者適當結合,才能避免低溫對生物體的損傷;②冷凍干燥,即在凝固狀態下,依靠真空干燥使水分升華,以防止因速冷而凝固的液體在溫度回升時又形成冰晶。生物樣品經冷凍干燥后在常溫下即可儲存,是一種較為理想的保存方法。但這種方法在溫度過低時, 升華過慢, 溫度偏高時又很難避免冰晶的形成,而且完全脫水也會給復雜的生物體帶來某些不可恢復的損傷。因此只用于保存生物制品乳品、食品,以及菌種和病毒(見菌種保藏)等。
低溫生物菌種保藏有雙重“保險”
作為我國可同時提供一般菌種資源服務和專利生物材料保存的保藏中心,保藏中心于1995年被列入“布達佩斯條約國際保藏單位”,成為一個持有國際牌照的微生物“銀行”。
“這里主要是收集、保藏、鑒定、交換和供應各類生物材料?!币恍┭邪l中分離出的菌種,暫時不知道有什么功能,就作為資源儲備儲存;而研究課題需要收集、篩選的菌類,結題后也可存放備份。幾十年來,保藏中心共提供了幾十萬株各類微生物菌種,在我國生命科學和生物技術研發中貢獻。
低溫生物菌種貯存的方式
1.冷凍真空干燥法。將已培養、生長豐富的菌體或孢子懸浮于滅菌的、卵白、脫脂奶制成菌懸液,將懸液以無菌操作分裝于滅菌的玻璃安瓿瓶中,每管約0.3-0.5毫升,然后用耐壓橡皮管與冷凍干燥裝置連接,安瓿瓶放在冷凍槽中于-30℃至-40℃迅速冷凍,并在冷凍狀態下抽空干燥,并在真空狀態下熔封安瓿,在-20℃保存,一般可保存十年以上,但成本較高。
2.液氮超低溫保藏法。首先將要保藏的菌種制成菌懸液備用;其次,準備安瓿瓶,每瓶加入0.8毫升冷凍保護劑10%(體積比)甘油蒸餾水溶液,塞棉塞滅菌(1公斤/平方厘米,5分鐘)。無菌檢查后,接入要保藏的菌種,火焰熔封瓶口,檢查是否漏氣,將封好口的安瓿瓶放在凍結器內,以每分鐘下降1℃的速度緩慢降溫,使保藏品逐步均勻地凍結,直至-35℃,以后凍結速度就不需控制,安瓿凍結后立即放入液氮罐內,在-150至-196℃保藏,該法只有少數科研院所使用。