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核酸試劑盒

樣本采集質(zhì)控重要性

樣本采集作為核酸檢測(cè)的首步，其中涉及的采樣耗材和病毒保存液的質(zhì)量保證對(duì)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要，不合格樣本會(huì)直接影響檢驗(yàn)結(jié)果。在新冠核酸檢測(cè)中，不合格樣本通常是由于采樣問題和采樣用具問題導(dǎo)致的。

合格的病毒保存液目前主要要求兩點(diǎn)：

1.保證病毒的充分滅活，防止采樣、運(yùn)輸和檢測(cè)過程的風(fēng)險(xiǎn)。

2.保證病毒核酸（RNA）在采集、運(yùn)輸過程中的穩(wěn)定性，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，防止樣本運(yùn)輸保存過程中降解導(dǎo)致檢測(cè)的“假陰性”。

英國(guó)TwistDx 公司（前身為ASM科技有限公司）成立于1999年，基于英國(guó)劍橋Babraham研究院建立的生物技術(shù)公司。該公司通過突破等溫DNA擴(kuò)增，開發(fā)的重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)(RPA),被譽(yù)為DNA診斷領(lǐng)域的革命性創(chuàng)新。

RPA技術(shù)主要依賴于三種酶:能結(jié)合單鏈核酸（寡核苷酸引物）的重組酶、單鏈 DNA結(jié)合蛋白(SSB）和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，反應(yīng)溫度在37°C左右。

RPA技術(shù)主要依賴于三種酶：能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，反應(yīng)溫度在37°C左右。

重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會(huì)發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動(dòng)DNA合成，對(duì)模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進(jìn)一步替換。在這個(gè)體系中，由兩個(gè)相對(duì)的引物起始一個(gè)合成事件。整個(gè)過程進(jìn)行得非常快，一般可在十分鐘之內(nèi)獲得可檢出水平的擴(kuò)增產(chǎn)物。RPA擴(kuò)增的基礎(chǔ)體系(TwistAmp? Basic)含有DNA擴(kuò)增所需的所有試劑，我們只要準(zhǔn)備好引物和模板就行。擴(kuò)增結(jié)果可以通過凝膠電泳進(jìn)行終點(diǎn)檢測(cè)，產(chǎn)物純化后可用于下游研究。

在這個(gè)基礎(chǔ)體系中添入不同的酶和探針，就可以實(shí)現(xiàn)多樣化的RPA應(yīng)用。舉例來說，TwistAmp? exo結(jié)合了exo探針技術(shù)和核酸外切酶III，能實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)的實(shí)時(shí)讀取，就像熒光定量PCR一樣。不過反應(yīng)終點(diǎn)的擴(kuò)增子總量有所減少，適合獲得強(qiáng)熒光信號(hào)進(jìn)行動(dòng)力學(xué)分析，不適合終點(diǎn)檢測(cè)(比如跑膠)。將exo探針技術(shù)、核酸外切酶III和逆轉(zhuǎn)錄酶結(jié)合起來，可以一步實(shí)現(xiàn)RNA模板的實(shí)時(shí)擴(kuò)增。