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              發布時間:2020-09-08 19:04  






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              如果檢測到熒光信號超過域值被認為是真正的信號,它可用于定義樣本的域值循環數(Ct)。Ct值的含義是:每個反應管內的熒光信號達到設定的域值時所經歷的循環數。研究表明,每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數的對數存在線性關系,起始拷貝數越多,Ct值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線,因此只要獲得未知樣品的Ct值,即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。溫度上的高分辨率使得運用定量PCR儀進行高分辨率熔解曲線(HRM)分析基因型成為可能。

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              擴增序列特異性檢測方法是在PCR反應中利用標記熒光染料的基因特異寡核苷酸探針來檢測產物,它又可分為直接法和間接法。間接的方法就是利用水解探針的策略。目前在real-time Q-PCR中廣泛使用的TaqMan系統就是運用了這個原理。PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團,此時5′端熒光基團吸收能量后將能量轉移給臨近的3′端熒光淬滅基團(發生熒光共振能量轉移,FRET),因此探針完整時,檢測不到該探針5′端熒光基團發出的熒光。(3)目前real-timeQ-PCR實驗成本比較高,從而也限制了其廣泛的應用。


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              根據動物防疫法及其配套規章規定,縣級動物衛生監督機構依法向屠宰場派駐(出)官i方獸醫實施屠宰檢疫。按照生豬屠宰檢疫規程和相關規定,屠宰檢疫內容包括傳i染病和寄i生蟲病,檢疫流程包括生豬進入屠宰廠(場、點)監督查驗、檢疫申報、宰前檢查、同步檢疫、檢疫結果處理以及檢疫記錄等。在非洲防控期間,官i方獸醫監督屠宰企業開展非洲自檢,對沒有開展自檢的屠宰企業,對屠宰后的生豬產品一律不得出具動物檢疫證明。而且目前公認ASFV對外界的抵抗力強,在自然條件下可以長時間保持感i染性,可以在血液、糞便和各種組織中長期保持感i染性。

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              實時熒光定量PCR(real-time quantitativePCR)/QRT-PCR,是指在PCR反應體系中加入熒光標記物,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,后通過擴增曲線對未知模板進行定量分析的方法。一般用于mRNA轉錄水平的定量研究、不同樣本或基因組中DNA拷貝數的測定、基因芯片結果驗證、藥i效分析等。金開瑞采用SYBR熒光染料法及TaqMan探針法進行熒光定量PCR檢測,從引物設計到檢測一次性完成,提供2種常用的內參引物及免費的專業數據分析,每個樣品設置至少三個平行對照,保證結果的準確可靠。廣州勱博--博日病毒核酸提取系統在PCR擴增中,溶液中的模板變性后低溫退火時,引物與探針同時與模板結合。


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              定量PCR已經從基于凝膠的低通量分析發展到高通量的熒光分析技術,即實時定量PCR。實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,由于該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點。實時定量PCR (real-time quantitative PCR)是指在PCR指數擴增期間通過連續監測熒光信號強弱的變化來即時測定特異性產物的量,并據此推斷目的基因的初始量,不需要取出PCR產物進行分離。從20世紀60和70年代i開始ASF由非洲蔓延至歐美地區,2007年格魯吉亞、亞美尼亞、阿塞拜疆和俄羅斯都出現了大面積流行,2018年8月也開始在我國快速蔓延開來,對我國養豬業的持續穩定發展構成巨大威脅。

              廣州勱博--博日非洲病毒快速檢測試劑盒

              PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;廣州勱博--養殖場核酸提取純化在PCR反應早期,產生熒光的水平不能與背景明顯地區別,而后熒光的產生進入指數期、線性期和最終的平臺期,因此可以在PCR反應處于指數期的某一點上來檢測PCR產物的量,并且由此來推斷模板最i初的含量。PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步.


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