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發布時間:2020-07-23 09:15  





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據介紹,該發明公開了一種非洲病毒 CP530R 基因的熒光 PCR 檢測試劑及其制備方法與用途,設計合成了一套特異性的引物及 Taqman 探針和陽性對照,并利用該引物及探針建立了一種快速簡便、特異性強、靈敏度高的熒光 PCR 檢測體系,可在 3~4 小時內從被檢樣本中快速、準確、特異、安全、簡便地檢出 ASFV CP530R 基因,可用于來自家豬、和軟蜱的各種樣本中微量非洲病毒CP530R 基因的檢測。廣州勱博--冷凍食品加工企業/公司/廠熒光定量PCR相對定量可以對每個樣本中模版的其實水平之間的差異進行精i確比較,沒必要知道模版的確切拷貝數,并且樣本模板中的相對水平不用使用標準曲線就可以確定。
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非洲 ( ASF ) 是由非洲病毒 ( ASFV ) 引起豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳i染病。不同的核酸序列,哪怕僅有一個堿基的差異,也會體現在熔解溫度的差別上。從 20 世紀 60 和 70 年代i開始 ASF 由非洲蔓延至歐美地區,2007 年格魯吉亞、亞美尼亞、阿塞拜疆和俄羅斯都出現了大面積流行,2018年8月也開始在我國快速蔓延開來,對我國養豬業的持續穩定發展構成巨大威脅。因此,本方法為快速診斷非洲病毒,提供了有力的技術手段。
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豬肉制品加工企業、生豬產品經營者采購生豬產品應當批批查驗其動物檢疫合格證明、肉品品質檢驗合格證明以及非洲病毒檢測結果(報告),確保購進的生豬產品不帶非洲病毒;采購的進口生豬產品應附有合法的入境貨物檢驗檢疫合格證明。廣州勱博--生豬屠宰場病毒核酸提取系統經銷根據動物防疫法及其配套規章規定,縣級動物衛生監督機構依法向屠宰場派駐(出)官i方獸醫實施屠宰檢疫。不得采購沒有非洲病毒檢測結果(報告)及未經檢疫或者檢疫不合格的生豬產品,確保豬肉制品和經營的生豬產品不含非洲病毒。
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所謂real-time Q-PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。研究表明,每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數的對數存在線性關系,起始拷貝數越多,Ct值越小。在real-time 技術的發展過程中,兩個重要的發現起著關鍵的作用:(1)在90年代早期,Taq DNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發現,它能降解特異性熒光記探針,因此使得間接的檢測PCR產物成為可能。(2)此后熒光雙標記探針的運用使在一密閉的反應管中能實時地監測反應全過程。這兩個發現的結合以及相應的儀器和試劑的商品化發展導致real-time Q-PCR方法在研究工作中的運用。
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熒光定量PCR技術產生并成熟于上世紀90年代,由于該技術實現了PCR從定性到定量的飛躍,能夠對PCR反應的全過程進行實時監控,并且自動化程度高,所以該技術從產生到現在短短的十幾年時間,在科研及檢驗領域獲得了廣泛的應用,成為分子生物學領域不可或缺的一項重要技術。熒光定量PCR技術是在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號隨著PCR反應的積累來實時監控PCR反應的進程,并通過分析軟件對PCR的反應進行檢測分析的技術。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。系統組成:定量PCR儀、電腦、分析軟件、試劑及耗材。
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進行熒光定量PCR體系的配制時i好在冰上進行,操作環境不用非得在超凈臺中進行,環境安靜整潔都可以。因為每一個梯度要做三個重復,因此先在1ml的無菌離心管中配制好后再分裝入96孔板中。實驗中我使用過熒光定量八聯管和96孔板,個人推薦96孔板。廣州勱博--生豬屠宰場PCR熒光定量PCR最早稱TaqManPCR,后來也叫Real-TimePCR,是美國PE(PerkinElmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。因為八聯管你需要蓋上蓋子,而且蓋子比較的難按下去,稍不慎就把八聯管弄斷或者液體撒出來。有的時候一下忘記了是從哪邊開始的。96孔板比較方便,加完樣品后只需附上一層膜,用它自帶的板子撫平即可。上機器前i好離心一下,讓貼在管壁上的液體流下來同時也消掉氣泡。
廣州勱博儀器有限公司產品服務包括:非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動核酸提取純化系統、病毒核酸提取系統、非洲病毒快速檢測試劑盒。一般用于mRNA轉錄水平的定量研究、不同樣本或基因組中DNA拷貝數的測定、基因芯片結果驗證、藥i效分析等。我們的客戶對象是食品企業/公司/廠、食品加工企業/公司/廠、冷凍食品加工企業/公司/廠、養殖場、養豬場、屠宰場、生豬屠宰場。
一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋, 無法判斷產物量的變化。該技術是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現其定量功能的。而在平臺期,擴增產物已不再呈指數級的增加,PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數。只有在熒光信號指數擴增階段, PCR產物量的對數值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值.
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什么是熒光定量PCR?常規PCR中,擴增產物(擴增子)是通過終點法來分析檢測,即PCR反應結束后,DNA通過瓊脂糖凝膠電泳,然后進行成像分析。而熒光定量PCR可以在反應進行過程中進行累積擴增產物的分析和檢測,即“實時”。在反應體系中加入熒光分子,通過熒光信號的按比例增加來反應DNA量的增加,使PCR產物的實時檢測成為可能。如采用常規的終點檢測法(利用EB染色來判斷擴增產物的多少,從而間接的判斷起始拷貝量),即使起始模板量相同經PCR擴增、EB染色后也完全有可能得到不同的終點熒光信號強度。滿足實驗目的的熒光化學物質包括DNA結合染料和熒光標記的序列特異引物或探針;專門的熱循環儀配備熒光檢測模塊,用于監測擴增時的熒光,檢測到的熒光信號反映了每個循環擴增產物的量。