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低溫生物菌種知多少？

實驗室菌種的傳代保藏過程

1. 按菌種說明書要求復溶菌粉，轉種于適當的增菌培養基內（G1），復壯后轉接至平板上，并于適當溫度下培養適當時間，分離出單個純種菌落，此為第2代（G2）。

2. 菌種鑒定完成后，挑取純菌落制成濃菌懸液用于制備甘油冷凍管，同時挑取純菌落轉接斜面菌種作為工作用菌種。此時，保藏菌種為第2代，但工作用菌種則為第三代。

3. 將第2代菌種管冷凍保存，將工作用菌種于適當溫度下培養適當時間后可用于試驗。

4. 取一支冷凍保存的G2代菌種轉種于平板和斜面培養基上，平板上的菌種制成冷凍保藏管第三代（G3），斜面培養基經適當溫度下培養適當時間后用作工作用菌種（W3）。

5. 將第三代菌種（G3）冷凍或低溫保存，將生長、轉種后的G2菌種經滅菌處理后丟棄。

6. 當工作用菌種代數小于5時，可直接用上一代工作用菌種轉接下一代工作用菌種，如W3可直接轉接為W4。

7. 按上述程序操作，直至G4轉為W5為止，需重新開啟安瓿，再重復上述操作程序、保藏和使用菌種。

以上方法中，菌種被分為兩類。傳代用菌種和工作用菌種，傳代用菌種用于甘油冷凍管法保藏，工作用菌種用斜面低溫保藏法保藏。

實驗證明，甘油冷凍管的有效期至少為2年，但其主要適用于細菌（需氧）、酵母菌的傳代、保藏、真菌和芽孢類細菌則需應用其它方法。

低溫生物菌種的作用

從18年開始，就對北京順義馬坡工業區污水廠（日處理2000噸））進行微生物改良，經菌種改良后，馬坡污水廠各項出水指標均低于北京排放標準，一直平穩運行，被順義環保局評為污水站。18年又連續對河北承德日處理5萬噸的污水廠和遼寧長嶺縣日處理2萬噸的污水廠進行微生物改良，都取得了非常好的改良效果，冬季低溫氨氮指標一直持續穩定達標，平穩運行，沒有二次再補充過耐低溫生物菌種。

                                                         低溫生物菌種有哪些保藏法？

1、傳代培養保藏法：包括又有斜面培養、穿刺培養、皰肉培養基培養等，培養后于4-6℃冰箱內保存。

2、液體石蠟覆蓋保藏法：液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養的變相方法，能夠適當延長保藏時間。

3、載體保藏法：載體保藏法是將微生物吸附在適當的載體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進行干燥的保藏法。

4、寄主保藏法：寄主保藏法用于目前尚不能在人工培養基上生長的微生物。

5、冷凍干燥保藏法：先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現象除去水分（真空干燥），其中真空冷凍干燥法常見。