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              發(fā)布時(shí)間:2021-09-15 04:43  






              等溫核酸試劑盒


              據(jù)介紹,RPA檢測的靈敏度很高,能夠?qū)⒑哿康暮怂?尤其是DNA)模板擴(kuò)增到可以檢出的水平,從單個(gè)模板分子得到大約1012擴(kuò)增產(chǎn)物。而且RPA還用不著復(fù)雜的樣品處理,適用于無法提取核酸的實(shí)地檢測。RPA不僅可以對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行終點(diǎn)檢測,還可以對擴(kuò)增過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控,甚至可以通過試紙條(側(cè)流層析試紙條LFD)讀取結(jié)果。

              目前,TwistAmp? 試劑盒的擴(kuò)增子長度在500bp以內(nèi)。不過,經(jīng)過特別優(yōu)化的RPA擴(kuò)增,也可以生成更長的擴(kuò)增產(chǎn)物,或者減慢擴(kuò)增速度(便于定量),甚至在更低的溫度下進(jìn)行反應(yīng)。

              FAQ

              1 RPA能實(shí)現(xiàn)多重化嗎?

              可以。RPA技術(shù)支持在同一個(gè)管中同時(shí)進(jìn)行多個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)。不過,多重化的引物組合需要精心設(shè)計(jì),以便每個(gè)引物都能同樣有效的工作。需要注意的是,RPA反應(yīng)的引物總量(nmol)不要超標(biāo)太多。如果在一個(gè)反應(yīng)中使用兩個(gè)以上的擴(kuò)增引物,就應(yīng)該控制不同引物的量。另外,我們應(yīng)當(dāng)事先考慮好檢測多個(gè)擴(kuò)增事件的探針、設(shè)備以及熒光團(tuán)的兼容性。



              能否對模板進(jìn)行定量?

              可以。擴(kuò)增子達(dá)到可檢出水平的時(shí)間,依賴于反應(yīng)起始時(shí)的模板量。初始模板的拷貝越多,擴(kuò)增子就越快達(dá)到可檢出水平。不過,這種定量需要精心的實(shí)驗(yàn)安排,確保對照反應(yīng)是同時(shí)開始的。舉例來說,可以利用鎂離子的添加時(shí)間進(jìn)行控制。因?yàn)殒V離子一旦進(jìn)入體系,RPA反應(yīng)就會(huì)開始。

              此外,較慢的擴(kuò)增過程有助于的定量。我們可以通過調(diào)整反應(yīng)條件或引物設(shè)計(jì)來減慢RPA的反應(yīng)速度。




              試劑盒

              英國TwistDx Inc公司開發(fā)的重組酶聚合酶擴(kuò)增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)--被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術(shù),目前新的等溫?cái)U(kuò)增檢測技術(shù)。以此為基礎(chǔ)的TwistAmp? 核酸擴(kuò)增產(chǎn)品,能夠在15分鐘內(nèi)進(jìn)行常溫下的單分子核酸檢測。該技術(shù)對硬件設(shè)備的要求很低,特別適合用于體外診斷、獸醫(yī)、食品安全、生物防御和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。常規(guī)PCR必須經(jīng)過變性、退火、延伸三個(gè)步驟,而PCR儀本質(zhì)上就是一個(gè)控制溫度升降的設(shè)備。RPA反應(yīng)的適宜溫度在37°C - 42°C之間,無需變性,在常溫下即可進(jìn)行。這無疑能大大加快PCR的速度。此外,由于不需要溫控設(shè)備,RPA可以真正實(shí)現(xiàn)便攜式的快速核酸檢測。據(jù)介紹,RPA檢測的靈敏度很高,能夠?qū)⒑哿康暮怂?尤其是DNA)模板擴(kuò)增到可以檢出的水平,從單個(gè)模板分子得到大約1012擴(kuò)增產(chǎn)物。而且RPA還用不著復(fù)雜的樣品處理,適用于無法提取核酸的實(shí)地檢測。RPA不僅可以對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行終點(diǎn)檢測,還可以對擴(kuò)增過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控,甚至可以通過試紙條(側(cè)流層析試紙條LFD)讀取結(jié)果。




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