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HPLC對流動相的一般要求

流動相就比如人體的血液，其質量直接影響到整個系統的正常運行與否。

© 應該使用HPLC級的溶劑，不能互相混溶的溶劑不可以直接切換！

© 注意溶劑的截止波長。截止波長是指該溶劑可以在紫外檢測器中使用的很低波長,低于該波長后,溶劑會有很強的紫外吸收，從而影響極限的穩定性、干擾對所分析物質的檢測。

© HPLC所使用的水必須是新鮮的和經過0.45μm濾膜過濾過的。建議每天更換新鮮的水。長期不用時，必須把使用水的管路用有機的溶劑置換，防止長霉。

© 儀器使用完后要采用適當的溶劑沖洗等方法維護色譜柱和系統。如果使用了緩沖鹽一定先將鹽要沖洗干凈。

© 當有流路堵塞時，可以嘗試將之反接后沖洗。污染的溶劑或溶劑瓶里的藻類生長將會縮短溶劑過濾器的使用壽命，并且影響泵和系統的的性能。這在水溶劑或磷酸鹽緩沖液(pH 4 至7) 中尤其如此。

HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法是什么？

①樣品量不足，解決辦法為增加樣品量

②樣品未從柱子中流出?？筛鶕悠返幕瘜W性質改變流動相或柱子

③樣品與檢測器不匹配。根據樣品化學性質調整波長或改換檢測器

④檢測器衰減太多。調整衰減即可。

⑤檢測器時間常數太大。解決辦法為降低時間參數

⑥檢測器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。

⑦檢測池中有氣泡。解決辦法為排氣。

⑧記錄儀測壓范圍不當。調整電壓范圍即可。

⑨流動相流量不合適。調整流速即可。

⑩檢測器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。

高效液相色譜儀在生物制藥中的應用

高效液相色譜儀是近幾十年發展起來的一種高效、快速的分離分析技術，是現代分離檢測的重要工具。高效液相色譜儀是以經典液相色譜儀為基礎，引入氣相色譜儀的理論和實驗方法，將流動相改為高壓輸送，采用高效固定相和在線檢測等手段，發展而成的分離分析技術，具有高壓、高速、高效、高靈敏度、高選擇性和應用范圍廣等特點，成為生物制藥領域發展快、應用廣的現代分析技術之一。

二、高效液相色譜儀在檢測藥含量方面的應用：

藥與人類的健康、生活質量的提高關系極大，許多藥品由于受到純度的影響，效果不能充分發揮，甚至產生毒副作用；有時服用前需作各種試驗，帶來很多麻煩，高效液相色譜儀的檢測就比較簡單，是分離與純化藥的較佳選擇。由于高效液相色譜儀具有靈敏度高、快速簡便和專一性的特點，廣泛應用于藥分析，特別在干擾較多的時候表現得比其它方法好。

三、高效液相色譜儀在檢測制藥廢水中的應用：

制藥廢水中的殘留藥成分對環境造成的污染越來越嚴重, 制藥廢水的治理已成為環境保護工作中相當重要的方面。

高效液相色譜儀流動相(MOBLLE PHASE)的問題

1、流動相的過濾。

配制好的流動相在使用前一定要先用0.5um孔徑的微孔濾膜來過濾。這是因為溶液中含有很多肉眼難以發現的微小顆粒，如果不把它們濾除掉，就會堵塞泵口、柱頭上的過濾器，這樣就堵塞了流動相的正常通道，使色譜柱的阻力增加，柱壓升高，柱效下降。碰到這種情況時，要換用經過濾的流動相，并將堵塞的濾器拆下來浸泡在20%的硝酸水溶液中以超聲波清洗機清洗20分鐘，以除去濾片上的堵塞物。

2、流動相的脫氣。

流動相在使用前必須脫氣，以盡可能的除去溶解在流動相中的氣體，否則，這些氣體會使柱填料的性能降低，還能夠對檢測器的信號產生很大的干擾。脫氣有多種方法，如超聲脫氣、真空脫氣、氮氣脫氣等。真空脫氣法和氮氣流脫氣法是目前常用的脫氣法。水和甲醇混合后會產生大量的氣泡，如果不脫氣就使用，氣泡就會進入色譜柱和檢測器，并將影響分析工作的正常進行。