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發(fā)布時(shí)間:2020-12-15 08:00  





氨又稱三(羥), 一般稱 tris ,白色結(jié)晶粉末,無臭,味微甜而帶苦,易溶于水。廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的緩沖液的制備。此外,Tris還是制備表面活性劑、硫化促進(jìn)劑和一些的中間物。氨為非鈉的氨基緩沖堿。在體液中可與水起反應(yīng),而使其減少。適用于代謝性酸血癥,也適用于呼吸性酸血癥,對(duì)代謝性酸血癥合并急性呼吸性酸血癥的是比較理想的。
02、緩沖溶液的選擇與計(jì)算
為了保證緩沖溶液有足夠強(qiáng)的緩沖能力,在配制緩沖溶液時(shí),需要做到:
為使共軛酸堿對(duì)的濃度比接近于1,應(yīng)根據(jù)所需要維持的pH范圍選擇合適的緩沖對(duì),使其中的弱酸的PKa等于或接近于所要求的pH。
例如,生物培養(yǎng)液中需用PH=7.0的緩沖溶液,已知H2PO4-的pKa2=7.21,因此,H2PO4—HPO42-是可以選擇的合適的緩沖對(duì)。如若配制PH=9.0的緩沖溶液,則可選擇NH3·H2O-NH4Cl緩沖對(duì)(pKa(NH4 )=9.25)。
此外,一些緩沖體系對(duì)溫度非常敏感,例如Tris-HCl緩沖液,如果你在25℃時(shí)將緩沖體系調(diào)至pH值8,pH值將在5℃時(shí)增加到8.58而在37℃時(shí)降到7.71。所以,如果打算在4℃條件下保存蛋白或在37℃進(jìn)行實(shí)驗(yàn),就應(yīng)該考慮到室溫下調(diào)的pH值可能在實(shí)驗(yàn)條件中就不適用了。 其他類型的色譜分離柱,如凝膠過濾柱和Ni2 親和層析柱,可能需要更高的鹽濃度。我一般用高達(dá)500 mM NaCl進(jìn)行高鹽淋洗,以防止蛋白和柱之間的非特異性結(jié)合。
5mol/L氯化鈉(NaCl):溶解29.2g氯化鈉于足量的水中,定容至100ml。
10N(NaOH):溶解400g顆粒于約0.9L水的燒杯中(磁力攪拌器攪拌),完全溶解后用水定容至1L。
10%SDS(十二烷基硫酸鈉):稱取100gSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的燒杯中,用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。
2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使終體積為100ml。