北京高效液相色譜方法承諾守信「創(chuàng)新通恒」

HPLC對流動(dòng)相的一般要求

流動(dòng)相就比如人體的血液，其質(zhì)量直接影響到整個(gè)系統(tǒng)的正常運(yùn)行與否。

© 應(yīng)該使用HPLC級的溶劑，不能互相混溶的溶劑不可以直接切換！

© 注意溶劑的截止波長。截止波長是指該溶劑可以在紫外檢測器中使用的很低波長,低于該波長后,溶劑會(huì)有很強(qiáng)的紫外吸收，從而影響極限的穩(wěn)定性、干擾對所分析物質(zhì)的檢測。

© HPLC所使用的水必須是新鮮的和經(jīng)過0.45μm濾膜過濾過的。建議每天更換新鮮的水。長期不用時(shí)，必須把使用水的管路用有機(jī)的溶劑置換，防止長霉。

© 儀器使用完后要采用適當(dāng)?shù)娜軇_洗等方法維護(hù)色譜柱和系統(tǒng)。如果使用了緩沖鹽一定先將鹽要沖洗干凈。

© 當(dāng)有流路堵塞時(shí)，可以嘗試將之反接后沖洗。污染的溶劑或溶劑瓶里的藻類生長將會(huì)縮短溶劑過濾器的使用壽命，并且影響泵和系統(tǒng)的的性能。這在水溶劑或磷酸鹽緩沖液(pH 4 至7) 中尤其如此。

高效液相空白色譜柱出峰的原因？

【分析原因】1.確定檢測波長，如果是末端吸收，排除三氟乙酸的干擾。

2.使用100%乙腈作為流動(dòng)相，乙腈作為樣品進(jìn)樣，如果為基線，則說明色譜柱及系統(tǒng)完好。

3.然后在換流動(dòng)相為10%乙腈和90%三氟乙酸水，樣品為乙腈，如果有上述“中間位置出現(xiàn)較大的色譜峰”，那說明八成問題在三氟乙酸上，或者稀釋三氟乙酸的水上。

4.如果上述2、3都有“中間位置出現(xiàn)較大的色譜峰”，檢查檢測器及進(jìn)樣器。

5.這些還不能解決，請聯(lián)系工程師

高效液相色譜儀-色譜峰的雙峰問題

長期使用后的色譜柱，如果有雜質(zhì)進(jìn)入，就會(huì)使色譜柱入口處的固定相“板結(jié)”并在流動(dòng)相所產(chǎn)生的高壓作用下，形成柱頭的塌陷，被分析的樣品組分的正常色譜峰就變成了雙峰，這時(shí)可按下述方法來修復(fù)色譜柱。首先將柱頭的緊固螺母旋下，這時(shí)就會(huì)發(fā)現(xiàn)柱頭內(nèi)的固定相已被壓縮進(jìn)去了，嚴(yán)重時(shí)可縮進(jìn)10mm以上。在這種情況下，我們可用針尖將流動(dòng)相表層板結(jié)變黃的部分摳掉，并以相同的固定相將此塌陷區(qū)填平、壓實(shí)，再將色譜柱的緊固螺絲上緊，修復(fù)工作即告結(jié)束。用經(jīng)過修復(fù)后的色譜柱再做樣品時(shí)，色譜峰就恢復(fù)正常了。

液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么？

①篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。

②存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子

③可能柱超載，減少進(jìn)樣量。

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