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              發布時間:2021-01-01 15:15  








              在Tris的使用中,需要注意:Tris緩沖液的pH值受溫度和濃度影響很大,因此在配制過程中要考慮使用環境。且來看看它在Bis-Tris, Tricine,TES,TAPS中如何發揮它的潛能的。因為Tris堿的堿性較強,所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液;對生物化學過程干擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發生沉淀。需要注意的是THAM緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大,緩沖液稀釋十倍,pH值的變化大于0.1,而且易吸收CO2所以需要密封。THAM主要就是用于生物緩沖劑的,與用于的緩血酸胺有差異,需要加以區別。




              Tris-HCl試劑桶裝。Tris、Tris鹽酸鹽、Tris-HCl緩沖溶液即用型pH值區別:1、Tris或Tris堿pH值為10-12,呈弱堿性;2、Tris鹽酸鹽pH值為4-6,呈弱酸性(有些產品為Tris與其鹽酸鹽的混合粉末,pH會有所上升);3、Tris-HCl緩沖溶液通常是按一定的Tris與HCl比例配置好的即用型緩沖溶液,pH值取決于兩者比例,常用的有7.4,7.6,8.0,8.8等,一般呈近中性,偏弱堿性。






              Tris緩沖液為弱堿性溶液,DNA在這樣的溶液中會被去質子化,從而提高其溶解性,所以在核酸的溶解及核酸提取中一般也使用Tris緩沖液。需要注意的是,因其配置溶液時顯堿性,會吸收部分空氣中能生成碳酸的二氧化碳氣體,所以需要將盛裝Tris溶液的瓶蓋蓋嚴。另外Tris溶液對溫度敏感,每升高1度,pH值下降0.03,配置時需維持在室溫。





               總的來說,TCEP是這三個還原劑中穩定的,但它也是昂貴的。我通常在純化過程的緩沖液中添加DTT,在后保存酶液的緩沖液中添加TCEP。一般比較合理的還原劑濃度是5~10mM。基本上你要確保還原劑濃度要遠遠高于你的蛋白濃度。因為DTT和巰在室溫下就會降解,所以需要將添加了還原劑的緩沖液處于低溫保藏,或者在使用時再添加還原劑。


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