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發(fā)布時(shí)間:2021-08-17 06:23  
蛋白質(zhì)結(jié)晶方法
液-液擴(kuò)散(Liquid–Liquid Diffusion) 這種方法中,蛋白質(zhì)溶液和含有沉淀劑的溶液是彼此分層在一個(gè)有小孔的毛細(xì)管中,一個(gè)測(cè)熔點(diǎn)用的毛細(xì)管一般即可(如圖1.2)。下層是密度大的溶液,例如銨或PEG溶液。如果如MPD被用作沉淀劑,它會(huì)在上層。以1:1混合,沉淀劑的濃度應(yīng)該是所期終濃度的二倍。兩種溶液(各自約5μl)通過針頭導(dǎo)入毛細(xì)管,先導(dǎo)入下層的。通過一個(gè)簡(jiǎn)易的搖擺式離心機(jī)去除氣泡。再加入上層,進(jìn)而兩層之間形成一個(gè)明顯的界面,它們會(huì)逐漸彼此擴(kuò)散。 Garc′?a-Ruiz and Moreno(1994)已經(jīng)發(fā)展液-液擴(kuò)散技術(shù)至法。蛋白質(zhì)溶液通過毛細(xì)力被吸入狹窄的管中,管的一端是封閉的。接著,開放端入置于小容器的凝膠中,凝膠使得管豎直,蛋白質(zhì)溶液與凝膠接觸。含有沉淀劑的溶液被倒在凝膠上,整個(gè)裝置被保存于封閉的盒子以防蒸發(fā)。沉淀劑通過凝膠和毛細(xì)管的擴(kuò)散時(shí)間可以由毛細(xì)管插入凝膠的深度控制,從而蛋白質(zhì)溶液中即可形成過飽和區(qū)域,毛細(xì)管底部高而頂部低。這也可作為一個(gè)篩選佳結(jié)晶條件的額外信息。
普通蛋白結(jié)晶板
在普通24孔板的基礎(chǔ)上發(fā)展出來用于結(jié)晶學(xué)研究。透明的PS材料,平整無變形的底提供了優(yōu)異的光學(xué)性能。孔緣突出于板面,減少孔間污染的風(fēng)險(xiǎn)。在“沉滴”(Sitting Drop)中,需要用到“微橋”(Micro-Bridges),結(jié)晶過程中或之后,“微橋”可以轉(zhuǎn)移到另外一個(gè)孔。可用VIEWseal?(676070)密封,也可以用蓋玻片通過硅油密封每一孔。
用于油下結(jié)晶(Microbatch),梯形的孔形可將樣品溶液集中于孔*,平的底部可在顯微鏡下觀察結(jié)晶的生長(zhǎng)。
蛋白結(jié)晶板技術(shù)
提出來的一項(xiàng)新型的分析技術(shù),是當(dāng)前分析科學(xué)活躍的發(fā)展領(lǐng)域之一,代表了新世紀(jì)分析儀器的發(fā)展方向。微流控芯片的發(fā)展有賴于不斷出現(xiàn)的微機(jī)電加工技術(shù),微流控芯片的結(jié)構(gòu)越來越復(fù)雜,功能也越來越多樣化,由此,研究和探索簡(jiǎn)便的加工技術(shù)成為微流控技術(shù)發(fā)展的一個(gè)重要組成部分,本的研究工作將圍繞著微流控蛋白質(zhì)結(jié)晶芯片不同材料的性能與功能要求來進(jìn)行相關(guān)加工技術(shù)的探討。 蛋白質(zhì)結(jié)晶微流控芯片是一種用于蛋白質(zhì)結(jié)品條件高通量、快速篩選的新設(shè)備,對(duì)于結(jié)構(gòu)生物學(xué)的發(fā)展具有重要意義,是目前研究的熱點(diǎn)。本根據(jù)蛋白質(zhì)結(jié)晶系統(tǒng)的要求,設(shè)計(jì)了具有雙層結(jié)構(gòu)的微流控芯片。