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等溫核酸試劑盒

試劑盒使用示例

試劑盒的產(chǎn)生正是為了使實驗人員能夠擺脫繁重的試劑配制及優(yōu)化過程，所以試劑盒中一般配備有相應(yīng)的使用說明書，用戶按照說明書不需或只需少量的優(yōu)化即可得到滿意的結(jié)果。

⑴試劑盒使用說明書

說明書一般包括公司標(biāo)志及名稱、試劑盒名稱、試劑盒組成、保質(zhì)期、使用領(lǐng)域、使用方法等項目

①一般在頁眉頁腳處為公司的名稱及標(biāo)志；

②接下來為試劑盒的名稱；

③試劑盒組成中應(yīng)為試劑盒中的所有內(nèi)容，為了簡潔明了，一般以表格的形式表現(xiàn)；

④操作步驟是試劑盒說明書中很重要的部分，內(nèi)容應(yīng)準(zhǔn)確、簡潔、易懂，不能包含帶有歧義的句子，更不能含糊其辭，排版上操作步驟應(yīng)將復(fù)雜的步驟拆解，使人一目了然。

核酸試劑盒是如何工作的？

病毒獨特的基因序列被設(shè)定為檢測靶點，通過對檢測樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增，因PCR反應(yīng)模板僅為DNA，因此在進(jìn)行PCR反應(yīng)前，應(yīng)將新型冠狀病毒核酸（RNA）逆轉(zhuǎn)錄為DNA，使靶點的DNA序列指數(shù)級增加，每一個擴(kuò)增出來的DNA序列都可以于預(yù)先加入的熒光標(biāo)記探針結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號，擴(kuò)增出來的靶點基因越多，累積的熒光信號就越強(qiáng)（就好比演唱會如果只有一個粉絲搖熒光棒很不顯眼，如果大家一起搖那就嗨了）。如果樣本中沒有該病毒，自然也就檢測不到熒光信號的增強(qiáng)了。

核酸試劑盒

RPA技術(shù)主要依賴于三種酶：能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，反應(yīng)溫度在37°C左右。

重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動DNA合成，對模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進(jìn)一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進(jìn)行得非常快，一般可在十分鐘之內(nèi)獲得可檢出水平的擴(kuò)增產(chǎn)物。RPA擴(kuò)增的基礎(chǔ)體系(TwistAmp? Basic)含有DNA擴(kuò)增所需的所有試劑，我們只要準(zhǔn)備好引物和模板就行。擴(kuò)增結(jié)果可以通過凝膠電泳進(jìn)行終點檢測，產(chǎn)物純化后可用于下游研究。

在這個基礎(chǔ)體系中添入不同的酶和探針，就可以實現(xiàn)多樣化的RPA應(yīng)用。舉例來說，TwistAmp? exo結(jié)合了exo探針技術(shù)和核酸外切酶III，能實現(xiàn)數(shù)據(jù)的實時讀取，就像熒光定量PCR一樣。不過反應(yīng)終點的擴(kuò)增子總量有所減少，適合獲得強(qiáng)熒光信號進(jìn)行動力學(xué)分析，不適合終點檢測(比如跑膠)。將exo探針技術(shù)、核酸外切酶III和逆轉(zhuǎn)錄酶結(jié)合起來，可以一步實現(xiàn)RNA模板的實時擴(kuò)增。

RPA是什么？

自PCR技術(shù)誕生以來已經(jīng)有三十年了。從經(jīng)典PCR、實時定量PCR再到現(xiàn)在的數(shù)字PCR，這一技術(shù)在不斷蛻變卻從未淡出我們的視野。英國TwistDx Inc公司開發(fā)的重組酶聚合酶擴(kuò)增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術(shù)。以此為基礎(chǔ)的TwistAmp? 核酸擴(kuò)增產(chǎn)品，能夠在15分鐘內(nèi)進(jìn)行常溫下的單分子核酸檢測。該技術(shù)對硬件設(shè)備的要求很低，特別適合用于體外診斷、獸醫(yī)、食品安全、生物防御和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。