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發(fā)布時(shí)間：2021-07-28 18:43
親和柱——原理介紹
親和柱的功能基于抗原與間可逆的特異性結(jié)合反應(yīng)，使其可從復(fù)雜樣品基質(zhì)中特異性地回收目標(biāo)化合物。上樣后，柱中以共價(jià)鍵形式偶聯(lián)在凝膠上的會(huì)與抗原（即目標(biāo)化合物）特異性結(jié)合，雜質(zhì)不會(huì)被結(jié)合，大部分隨樣品溶液流出小柱。通過淋洗的方式除去小柱內(nèi)剩余雜質(zhì)后，使用其他洗脫液（根據(jù)對(duì)應(yīng)產(chǎn)品說明書選擇）進(jìn)行洗脫即可得到潔凈的目標(biāo)化合物溶液，可直接用于后續(xù)檢測。
親和柱的適用范圍
親和柱，適用于基質(zhì)復(fù)雜、要求低的樣品中真菌檢測的凈化。親和柱中含有抗體，能夠結(jié)合萃取液中目標(biāo)真菌。在凈化過程中干擾物質(zhì)從柱上淋洗下來，而目標(biāo)真菌能夠固定在柱上，之后通過適當(dāng)溶劑將目標(biāo)真菌從親和柱上洗脫下來，實(shí)現(xiàn)了與雜質(zhì)的分離。
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親和柱——親和層析的原理
通常，在開始親和層析前需要預(yù)先進(jìn)行全細(xì)胞提取物的粗制，例如細(xì)胞裂解液，生長培養(yǎng)基。
首先將固定相裝入帶有流動(dòng)相的色譜柱中，其中含有某類特定的生物大分子（從DNA到蛋白質(zhì)，取決于實(shí)驗(yàn)需求）。等待一段時(shí)間使兩相充分混合，隨后將洗滌緩沖液倒入色譜柱中。洗滌緩沖液通過破壞非目標(biāo)生物分子與固定相的較弱結(jié)合來去除非目標(biāo)生物分子。目標(biāo)生物分子對(duì)固定相具有較高的親和力，因此能夠保持與固定相的結(jié)合，而不會(huì)被洗滌緩沖液沖走。然后將洗脫緩沖液倒入含有剩余目標(biāo)生物分子的色譜柱中。洗脫緩沖液比洗滌緩沖液，能夠從更大程度上減弱靶生物分子與固定相之間的相互作用，從而洗脫靶生物分子。洗脫得到的溶液包含洗脫緩沖液和目標(biāo)分子，稱為洗脫液。
固定相一般是凝膠基質(zhì)，常見的有瓊脂糖。為了防止目標(biāo)分子與配體結(jié)合過程中的空間干擾或重疊，首先將含有烴鏈的抑制連接到瓊脂糖珠（固體支持物）上。這種具有烴鏈的抑制通常被稱為瓊脂糖珠和靶分子之間的間隔基。
