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低溫生物菌種的注意事項

無論采用何種保藏方法，首先應該挑選典型菌種的優良純種來進行保藏，保藏它們的休眠體，如分生孢子、芽孢等。其次，應根據微生物生理、生化特點，人為地創造環境條件，使微生物長期處于代謝不活潑、生長繁殖受抑制的休眠狀態。這些人工造成的環境主要是干燥、低溫和缺氧，另外，避光、缺乏營養、添加保護劑或酸度中和劑也能有效提高保藏效果。

如何對微生物菌種進行活化

1 定期移植法的菌種復蘇較簡單，直接轉接即可；

2 液體石蠟法保存的菌種在復蘇時，挑取少量菌體轉接在適宜的新鮮培養基上，生長繁殖后，再重新轉接一次；

3  沙土管法保存菌種在復蘇時，在無菌條件下打開沙土管，取部分沙土粒于適宜的斜面培養基上，長出菌落后再轉接一次。或取沙土粒于適宜的液體培養基中，增殖培養后再轉接斜面；

4  真空冷凍干燥法保存菌種在復蘇時先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部，將安瓿管頂部燒熱， 用無菌棉簽沾冷水，在頂部擦一圈，頂部出現裂紋，用挫刀或鑷子頸部輕叩一下，敲下已開裂的安瓿管的頂端，用無菌水或培養液溶解菌塊，使用無菌吸管移入新鮮培養基上，進行適溫培養；

5  -80℃ 冰箱凍結法保存菌種復蘇時，從冰箱中取出安瓿管或塑料凍存管，應立即放置38℃-40℃水浴中快速復蘇并適當快速搖動。直到內部結冰全部溶解為止，約需50秒-100秒。開啟安瓿管或塑料凍存管，將內容物移至適宜的培養基上進行培養

6  液氮超低溫凍結法保存菌種復蘇與-80℃ 冰箱凍結法保存菌種復蘇相似，從液氮罐中取出安瓿管或塑料凍存管，應立即放置在38℃-40℃水浴中快速復蘇并適當搖動。直到內部結冰全部溶解為止，一般約需50秒-100秒。開啟安瓿管或塑料凍存管，將內容物移至適宜的培養基上進行培養。

低溫生物菌種處理的優勢

我國北方污水處理一直受到低溫影響，尤其氨氮處理效果差、出水難以達標等問題的困擾。目前污水廠一般采用增加污泥濃度、水力停留時間、池體保溫加蓋等措施以提高處理效果，但投資和運行費用增加的問題也隨之而來。溫度降低所導致的生物處理效果下降，歸根結底是由于當水溫低于15℃時，處生化系統中存在的低溫微生物的數量和活性不能達到常溫下中溫菌的水平，污水中的有機污染物質不能被迅速降解所導致的。因此，采用投加耐低溫生物菌劑的方式對東北地區污水處理廠生化處理系統的耐低溫菌種改良，對低溫快速啟動和污水處理廠污水穩定達標排放意義重大。

                                                 低溫生物菌種的分離方法有哪些？

先將所需的種藥用真菌采集回來，選取新鮮、個體大、壯實、中齡及無病蟲害的子實體（或菌核、菌索），作為分離用的材料。若為子實體，取其菌蓋或菌柄組織；若為菌核，取其全部或部分（如茯苓）菌核；若為菌索，取其部分根狀菌索（如蜜環菌）。再用0.1 %或75 %酒精進行表面消毒2 分鐘，用無菌水（或冷開水）沖洗數次，洗凈殘留的藥液后切成小塊。，然后，放入PDA 培養基的試管或培養皿上，置24 ～26℃溫度下，培養5 ～ 7 天。在分離的真菌組織周圍見長有白色菌絲時，應及時將菌絲移至斜面試管培養基上，再置溫度24 ～26 ℃下培養7～10 天，即得純菌種。所得的純菌種還可繼續擴大培養或保藏。