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發布時間：2020-11-15 13:10
低溫生物菌種的保存方法有哪些？
（一）培養基保存法
利用各種斜面和半固體培養基，加上石蠟油保存菌種，是一種簡易的保存方法。
1.普通瓊脂斜面保存法：腸道菌、等一般細菌可接種于不含糖的普通瓊脂斜面上，斜面底部應加少許無糖肉膏湯，以防干涸。經35℃培養18～24h后，移種于4℃冰箱中，一般可保存一個月，每月傳代一次。
2.血液瓊脂斜面保存法：鏈球菌、應接種于血液瓊脂斜面上，35℃培養生長后，置4℃冰箱中保存，鏈球菌須半個月至1個月移種一次，新分離菌株須2～4天移種一次，以后逐漸延長移種時間，在適應后可延至半個月移種一次。
3.巧克力色斜面保存法：宜保存菌，并在35℃孵箱中保存，一般每2天移種一次。
4.雞蛋斜面保存法：適于保存含有Vi抗原的沙門菌屬及其他含表面抗原的細菌，一般可保存一個月。
5.半固體穿刺保存法：將細菌接種于瓊脂半固體或瓊脂半固體內，經35℃培養18～24h，再以無菌方法加入滅菌的液體石蠟。高度約lcm，置4℃冰箱保存。保存時間可達3～6個月。
（二）干燥保存法
原理是將細菌體內的水分蒸發掉，使其處于休眠和代謝停滯狀態，從而達到長期保存菌種的目的醫|學教|育網搜集整理。菌種干燥后低溫保存，可保存數年至十幾年。
（三）冷凍干燥保存法
本法又稱冷凍真空干燥法。它綜合利用了各種有利于菌種保存的因素（低溫、干燥和缺氧等），是目前有效的菌種保存方法之一。用本法保存的菌種具有成活率高，變異性小等優點，保存期一般3～5年，有的可長達10年以上。
（四）脫脂牛奶保存法
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低溫生物菌種為什么能適應低溫環境？
微生物對溫度的要求不同與它們的膜結構物理化學性質有密切關系 根據細胞膜的液體鑲嵌模型，細胞在正常生理條件下，膜中的脂質成分應保持液晶狀態，只有當細胞膜處于液晶狀態，才能維持細胞的正常生理功能，使細胞處于生長狀態微生物的生長溫度與細胞膜的液晶溫度范圍相一致。
1、蛋白質結構
通過對嗜冷酶的蛋白質模型和x一射線衍射分析表明，嗜冷酶分子間的作用力減弱，與溶劑的作用加強，酶結構的柔韌性增加，使酶在低溫下容易被底物誘導產生催化作用。
2、蛋白質合成
嗜冷菌具有在0℃合成蛋白質的能力。這是由于其核糖體、酶類以及細胞中的可溶性因子等對低溫的適應，蛋白質翻譯的錯誤率相對低。許多中溫菌不能在O0C合成蛋白質，一方面是由于其核糖體對低溫的不適應，翻譯過程中不能形成有效的起始復合物，另一方面是由于低溫下細胞膜的破壞導致氨基酸等內容物的泄露。
3、合成冷蛋白
低溫微生物適應低溫的另一機制是合成冷休蛋白 將大腸菌從370C突然轉移到100C條件時細胞中會誘導合成一組冷休蛋白，它們對低溫的生理適應過程中發揮著重要作用，檢測嗜冷酵母的冷休反應，發現冷刺激后冷休蛋白在很短時間內大量產生。 耐冷菌由于生活在溫度波動的環境中，它們必須忍受溫度的快速降低，這與它們產生的冷休蛋白是密切相關的。
低溫生物菌種貯存的方式
1.冷凍真空干燥法。將已培養、生長豐富的菌體或孢子懸浮于滅菌的、卵白、脫脂奶制成菌懸液，將懸液以無菌操作分裝于滅菌的玻璃安瓿瓶中，每管約0.3-0.5毫升，然后用耐壓橡皮管與冷凍干燥裝置連接，安瓿瓶放在冷凍槽中于-30℃至-40℃迅速冷凍，并在冷凍狀態下抽空干燥，并在真空狀態下熔封安瓿，在-20℃保存，一般可保存十年以上，但成本較高。
2.液氮超低溫保藏法。首先將要保藏的菌種制成菌懸液備用；其次，準備安瓿瓶，每瓶加入0.8毫升冷凍保護劑10%（體積比）甘油蒸餾水溶液，塞棉塞滅菌（1公斤/平方厘米，5分鐘）。無菌檢查后，接入要保藏的菌種，火焰熔封瓶口，檢查是否漏氣，將封好口的安瓿瓶放在凍結器內，以每分鐘下降1℃的速度緩慢降溫，使保藏品逐步均勻地凍結，直至-35℃，以后凍結速度就不需控制，安瓿凍結后立即放入液氮罐內，在-150至-196℃保藏，該法只有少數科研院所使用。
