G蛋白活性檢測試劑盒品牌企業 紐斯特生物技術

1. VASP通過調節Rab11依賴性TGF-β受體的質膜靶向來促進肝星狀細胞的TGF-β活化

    肝l病學第61卷，首1期，第361-374頁，2015年1月

2. Rab5活性調節GLUT4分類為胰島素反應性和非胰島素反應性內體室：胰島素抵抗發展的潛在機制。

    內分l泌學。 2014年9月; 155（9）：3315-28

將裂解液轉移到適當大小的試管中，并置于冰上。

如果發生核裂解，則細胞裂解液可能變得非常粘稠，難以移液。 如果發生這種情況，可將裂解液通過27?號注射l器針頭3-4次以剪切基因組DNA。

通過離心10分鐘（在4°C下為12,000 x g）清除裂解物。

收集上清液并將樣品保存在冰上以備立即使用，或速凍并保存在-70°C以便將來使用。

小G蛋白是從屬于細胞調節因子中的一個超家族。Rho家族是小G蛋白中的一個亞家族，它在細胞運動、細胞分裂以及基因轉錄中發揮主要作用。而本試劑盒中的Cdc42就屬于Rho亞家族中的一種， Cdc42參與生理活動過程中其分子結構會呈現出2種相互轉換的形式：與GTP結合的激l活狀態和與GDP結合的非活性狀態。

目前Cdc42蛋白活性的檢測主要是依據小GTP酶Cdc42可以與p21活化激酶（PAK）的p21結合區域（PBD）結合，使PAK活化從而發揮生物學功能，進而間接的進行Cdc42活性l功能的監測。然而此方法在檢測過程中存在著一定的局限性比如GTP水解成GDP的速度過快以及Cdc42-GTP結合蛋白與p21結合區域之間較低的親和力，導致這種檢測方法的重復性較差。

試劑制備

1X Assay/Lysis Buffer：實驗前用去離子水將5X的Assay/Lysis緩沖液稀釋成1X的緩沖液，并在使用前加入蛋白酶抑制l劑如1 mM PMSF, 10 μg/mL leupeptin（亮肽素），或 10 μg/mL aprotinin（抑肽酶）。

樣品處理

貼壁細胞

1. 培養細胞密度達到大約80%-90%之間（直徑10 cm培養皿，~107個細胞），并用活性劑或抑制l劑進行處理。

2. 吸去培養基并用冰冷的PBS洗滌兩次。

3. 向細胞中加入1X Assay/Lysis緩沖液（每個直徑10cm的組織培養皿中加入0.5-1mL）。

4. 將培養皿放置于冰上處理10-20分鐘。

5. 用細胞刮棒把細胞從培養皿下分離下來。

6. 將細胞裂解物轉入合適的管中并放置于冰上。

7. 如果核發生裂解，細胞裂解物可能會變得非常的粘稠并且難以吸取。當這種情況出現時，將細胞裂解物用27?的注射l器針頭來回吸取3-4次，以破壞基因組DNA，從而避免上述情況的出現。

8. 4°C 12000 g, 離心10 min。

9. 收集上清（~1-2 mg總蛋白）并放置于冰上使用。如果樣品不立即使用，請將處理后的樣品存放于-70°C條件下。