熒光原位雜交電話「思特進」

就DNA探針和RNA探針的比較，DNA探針在雜交過程中會出現探針雙鏈之間退火的可能，也更傾向于在溶液中形成大分子的探針聚合體，從而影響其滲透能力。而RNA 探針的應用，將提高DNA-RNA雜交子的熱穩定性。

Tips：RNA探針因其單鏈、高分子結合力、可適應高溫雜交的特性，其檢測特異性和靈敏度均優于DNA探針。常用的RNA探針標記方法為構建質粒后進行轉率合成。通過PCR擴增的方法，可以更方便地進行RNA探針的制備；RNA探針合成后，還需驗證其對目標片段檢測的靈敏度和特異性。

多彩色熒光原位雜交技術：顯而易見，是熒光原位雜交的升級版，采用多個熒光來檢測，目前的發展及運用也是較多的。

原位PCR：將原位雜交結合PCR技術發展起來的實驗方法。

基因組原位雜交技術：該技術在我們的領域可能運用的畢竟少，主要是根據物種DNA同源性差異實現，在農作物等的雜交育種上運用較廣，

武漢思特進科技發展有限公司成立于2007年，是一家以實驗技術研發、實驗產品研發、日化產品研發、實驗項目承接為一體的高新技術公司；公司實驗中心有分子生物學平臺、細胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達平臺、日化產品生產平臺；可以開展各類動、植物、細菌、細胞等生物實驗。

原位雜交組織（或細胞）化學技術簡稱原位雜交（In situ hybridization, ISH）是應用已知堿基順序并帶有標記物的核酸探針與組織細胞內待測的核酸，按堿基互補配對原則進行特異性結合，形成雜交體，然后用與標記物相應的檢測系統，通過組織化學或免3疫組織化學方法在核酸原有位置進行細胞內定位、定性和定量研究。為分子水平研究細胞內基因表達及有關細胞5因子的調控提供了有效的工具。可視為組織化學與免3疫組織化學的重大突破。

原位雜交不需要從組織中提取核酸，對于組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性，并可完整地保護組織和細胞的形態，更能準確地反映出組織細胞的相互關系及功能狀態。

雜交技術zui重要的因素之一是選擇zui適的雜交反應溫度。若反應溫度低于Tm 10～15℃，堿基順序高度同源的互補鏈可形成穩定的雙鏈，錯配對減少。若反應溫度再低（Tm-30℃），雖然互補鏈之間也可形成穩定的雙鏈，但互補堿基配對減少，錯配對增多、氫鍵結合的更弱。如兩個同源性在50%左右或更低些的DNA，調整雜交溫度可使它們之間的雜交率變化10倍，因此在實驗前必須首先確定雜交溫度。通常有三種溫度可供試驗，即zui適復性溫度、苛刻復性溫度及非苛刻復性溫度。溫度的選擇及溫度對雜交的影響見表18-3。

zui適復性溫度（Optimunm renaturation temperature, TOR）：Tor =Tm –25℃

苛刻復性溫度：Ts = Tm – (10或15℃)

非苛刻復性溫度：Tns =Tm – (30或35℃)