腺病毒滴度測(cè)定推薦「友名生物」

第yi代腺病毒載體：一般將E1或E3基因缺失的腺病毒載體稱為第yi代腺病毒載體，此類型載體在未經(jīng)過純化時(shí)可引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的炎1癥反應(yīng)和免1疫反應(yīng)，純化后可以安全使用，體內(nèi)表達(dá)周期可達(dá)4周。

第二代腺病毒載體：E2A或E4基因缺失的腺病毒載體被稱為第二代腺病毒載體，產(chǎn)生的免1疫反應(yīng)較弱其載體容量和安全性方面有所改進(jìn)，但病毒包裝難度和出毒和病毒滴度下降厲害，應(yīng)用相當(dāng)局限。

第三代腺病毒載體：第三代載體缺失了全部的（無病毒載體，gutless vector）或大部分腺病毒基因（微型腺病毒載體，mini Ad），僅可保留ITR和包裝信號(hào)序列。第三代腺病毒載體zui大可插入35kb的基因，病毒蛋白表達(dá)引起的細(xì)胞免1疫反應(yīng)進(jìn)一步減少，載體中引入核基質(zhì)附著區(qū)基因可使得外源基因保持長(zhǎng)期表達(dá)，并增加了載體的穩(wěn)定性。這一載體系統(tǒng)需要一個(gè)腺病毒突變體作為輔助病毒。

腺病毒是無胞膜的線性雙鏈DNA病毒，目前腺病毒科分為5個(gè)屬，有多種型別的腺病毒已經(jīng)被開發(fā)為基因轉(zhuǎn)移載體，在基礎(chǔ)科研、基因cure和載體疫1苗領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。

腺病毒的基因組長(zhǎng)約26-46kb，這使得腺病毒載體的構(gòu)建與常見質(zhì)粒載體(一般長(zhǎng)度小于10kb)不同。太長(zhǎng)的基因組使得在腺病毒載體上富集一個(gè)多克1隆位點(diǎn)非常困難。針對(duì)重組腺病毒的構(gòu)建，開發(fā)了多種方法。

目前已有的腺病毒載體系統(tǒng)均存在缺陷，有些構(gòu)建步驟繁瑣，耗時(shí)較長(zhǎng)，有些在重組病毒中引入了不必要的外源序列，有些不能用于重組腺病毒的反向遺傳改造。近年來，新的生物特性不同的腺病毒不斷被發(fā)現(xiàn)，因此，本領(lǐng)域?qū)?gòu)建過程更加快捷簡(jiǎn)便的、人工改造更加方便靈活的腺病毒載體系統(tǒng)和重組病毒構(gòu)建方法存在需求。

腺病毒呈無囊膜的球形結(jié)構(gòu),其病毒粒子在感1染的細(xì)胞核內(nèi)常呈晶格狀排列,每個(gè)病毒顆粒包含一個(gè)36 kb的線性雙鏈DNA,兩端各有一個(gè)100~600 bp的反向末端重復(fù)序列(inverted terminal re-pea,t ITR), ITR的內(nèi)側(cè)為病毒包裝信號(hào),是病毒包裝所需要的順式作用元件。基因組包含早期表達(dá)的與腺病毒copy相關(guān)的E1~E4基因和晚期表達(dá)的與腺病毒顆粒組裝相關(guān)的L1~L5基因。

線狀雙股DNA與核心蛋白形成直徑為60~65 nm的髓芯,被包裹于衣殼內(nèi)。衣殼呈二十面體對(duì)稱,由252個(gè)直徑8~10 nm的殼粒組成,殼粒排列在三角形的面上,每邊6個(gè),其中240個(gè)為六鄰體(非頂點(diǎn)殼粒) ,另12個(gè)為五鄰體基底(頂點(diǎn)殼粒)。每個(gè)六鄰體是六鄰體蛋白的同源三聚體,三聚體的六鄰體分子有一個(gè)三角形的塔尖和五面體的基底,塔區(qū)由4個(gè)環(huán)構(gòu)成即loop1、loop2、loop3、loop4,基底包含兩個(gè)區(qū)域P1、P2區(qū)[3]。六鄰體上的表位(epitope)是診斷不同血1清型的標(biāo)準(zhǔn),它包括哺乳動(dòng)物腺病毒屬的抗原成分,是病毒體對(duì)免1疫選擇壓力zui敏感的部位。

每個(gè)五鄰體基底上結(jié)合著1根(哺乳動(dòng)物腺病毒)或2根(禽腺病毒)長(zhǎng)9~77. 5 nm的纖維突起,這些纖維以五鄰體蛋白為基底由衣殼面伸出,纖維頂端形成頭節(jié)區(qū),纖突有血1清特異性,且含有負(fù)責(zé)體外血細(xì)胞凝集的種屬特異性抗原決定位點(diǎn)。

PCR核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室布局建設(shè)

核酸檢測(cè)前的生物安全防護(hù)（工作人員個(gè)人三級(jí)防護(hù)的穿戴）

1、穿戴流程：在基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的清潔區(qū)（更衣區(qū)）或者普通實(shí)驗(yàn)室的潔凈區(qū)，工作人員按順序依次穿戴好一次性帽子、醫(yī)1用N95口罩、一次性防護(hù)服、一次性鞋套、一次性防水靴套、防護(hù)目鏡和雙層乳膠手套，進(jìn)入樣本處理工作區(qū)域或?qū)嶒?yàn)室。

2、要點(diǎn)提示：

2.1、具備標(biāo)準(zhǔn)基因擴(kuò)增布局條件的實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)在清潔更衣區(qū)做好個(gè)人三級(jí)防護(hù)，條件有限的實(shí)驗(yàn)室亦可選擇在一潔凈的實(shí)驗(yàn)室中按流程穿戴好個(gè)人三級(jí)防護(hù)。

2.2、需佩戴醫(yī)1用N95口罩，若無醫(yī)1用N95口罩，可以考慮用普通N95/KN95口罩外加一次性外1科口罩的組合方式，但不要佩戴有呼吸閥的N95口罩。

2.3、佩戴N95口罩時(shí)需檢查密閉性，通過雙手按壓、深呼吸、左右轉(zhuǎn)頭等動(dòng)作嚴(yán)格檢查口罩是否佩戴正確。

2.4、一次性防護(hù)服已具備新型冠狀病毒核酸檢測(cè)的防護(hù)需求，有條件時(shí)可以考慮加穿一次性反穿隔離衣，穿衣時(shí)需由他人協(xié)助。

2.5、穿戴整齊的工作人員，應(yīng)按要求盡快進(jìn)入樣本處理的實(shí)驗(yàn)區(qū)域開展工作，嚴(yán)禁穿戴三級(jí)防護(hù)后再進(jìn)入普通實(shí)驗(yàn)區(qū)域或辦公區(qū)域。