Protein A層析介質信賴推薦「多圖」

生物分子的分離可以根據其尺寸大小、表面電荷、疏水性能、及與配基的親和作用性能的差異分別采用分子篩，離子交換，疏水，親和等層析分離模式。為了率把目標生物分子從復雜樣品里分離出來，并保持其生物活性，用于分離純化的層析介質材料必須滿足苛刻的要求。層析介質的性能主要取決于其介質材料組成、形貌、粒徑大小、粒徑分布、孔徑大小和分布、功能基團、及表面親水性能等。

層析介質功能基團對生物分離性能的影響

   功能基團的物理和化學性能是影響層析介質與目標分子的作用的主要因素，主要決定了生物分離模式并影響其分離的選擇性和載量，因此選擇合適功能配基及密度尤其重要。另外配基與基球表面距離也會影響其介質的分離性能，配基與基球表面距離可以通過鏈接配基和基球的手臂分子來調節(jié)。

病毒分離純化的挑戰(zhàn)與解決方案

 病毒結構通常由蛋白質為衣殼及核酸為內芯組成，其尺寸在20-100納米之間，與單一蛋白或核酸生物分子相比其結構復雜得多，分子量也大很多。因此用于蛋白分離純化的層析介質很難滿足病毒的分離純化的要求。主要原因是病毒尺寸大，而傳統(tǒng)蛋白分離純化的介質孔徑小，因此病毒在傳統(tǒng)層析介質的擴散速度慢，病毒在常規(guī)蛋白層析介質上的吸附只限于外表面一薄層區(qū)域，導致載量低，并使得病毒在操作中大量失活。為了滿足病毒分離純化需求，納微開發(fā)出三種病毒分離純化介質及解決方案，分別為超大孔單分散聚合物層析介質用于病毒分離純化；小粒徑無孔層析介質分離純化病毒；孔徑均一的整體柱分離純化病毒。

以純化溶瘤病毒為例，由于其在生產過程中存在宿主蛋白等雜質，純化前 SEC測試純度為6.5%。純化采用兩種基質相同的介質，其表面化學功能也很一致，主要區(qū)別是前者是無孔實心的層析介質，而后者是傳統(tǒng)的多孔層析介質。層析純化的方法是陰離子交換吸附然后梯度洗脫（Bind-elute）模式。從層析圖譜可以看出，在洗脫及CIP過程中無孔介質洗脫雜質更小，峰值更低，意味著上樣過程中結合的雜質會更少，有利于表面結合的病毒分子純化。通過對層析洗脫液SEC純度分析比較，發(fā)現(xiàn)用傳統(tǒng)的多孔層析介質實驗得到的病毒樣品純度為54%（圖 ），而用無孔的同類型介質實驗得到的病毒純度達到接近90%（圖 ）。

為了解決傳統(tǒng)整體柱制備技術難題，納微與臺灣材料合作開發(fā)出孔徑及孔隙率可精l確控制的新方法(Tantti整體柱)。這種方法是利用單分散聚合物微球為模板填充在整體柱中，然后把單體及交聯(lián)劑填充到微球的空隙中，加熱聚合后，再把模板微球清洗掉留下尺寸與微球模板大小一致的多孔整體柱。整體柱的孔徑大小可以通過模板微球大小進行精l確調節(jié)，不受反應條件影響，因此，柱與柱重復性好，且容易放大生產等。以單分散微球為模板制備孔徑可以精l確控制整體柱的孔徑大小，克服了傳統(tǒng)整體柱制備方法依靠相分離形成孔道結構不穩(wěn)定的缺陷。這種的整體柱將極大提升其病毒的分離純化性能，甚至為病毒、病毒類（疫l苗）、腺伴隨病毒(AAV)等生物大分子的分離純化帶來革命性的影響。