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發(fā)布時(shí)間：2021-09-08 08:27
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小G蛋白是從屬于細(xì)胞調(diào)節(jié)因子中的一個(gè)超家族。Rho家族是小G蛋白中的一個(gè)亞家族，它在細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞分裂以及基因轉(zhuǎn)錄中發(fā)揮主要作用。而本試劑盒中的Cdc42就屬于Rho亞家族中的一種， Cdc42參與生理活動(dòng)過(guò)程中其分子結(jié)構(gòu)會(huì)呈現(xiàn)出2種相互轉(zhuǎn)換的形式：與GTP結(jié)合的激l活狀態(tài)和與GDP結(jié)合的非活性狀態(tài)。
目前Cdc42蛋白活性的檢測(cè)主要是依據(jù)小GTP酶Cdc42可以與p21活化激酶（PAK）的p21結(jié)合區(qū)域（PBD）結(jié)合，使PAK活化從而發(fā)揮生物學(xué)功能，進(jìn)而間接的進(jìn)行Cdc42活性l功能的監(jiān)測(cè)。然而此方法在檢測(cè)過(guò)程中存在著一定的局限性比如GTP水解成GDP的速度過(guò)快以及Cdc42-GTP結(jié)合蛋白與p21結(jié)合區(qū)域之間較低的親和力，導(dǎo)致這種檢測(cè)方法的重復(fù)性較差。
試劑盒成分
特異性識(shí)別Cdc42活性構(gòu)象的鼠單克l隆抗l體（Anti-active Cdc42, Mouse MonoclonalAntibody (Catalog No. 26905)）：小管裝--30ul (抗l體濃度是1mg/ml)，抗l體溶于PBS（pH7.4）并包含50%的甘油和0.05%的疊氮l化鈉。此抗l體可以特異性識(shí)別所有脊椎動(dòng)物中的Cdc42-GTP。
Protein A/G agarose (Catalog No. 30301) ：小管裝—400ul包含200ul Protein A/G agarose 和200ul 20%乙醇溶液。（使用時(shí)溶液需要充分混勻，再吸?。?
5X Assay/Lysis Buffer (Catalog No. 30303)：小瓶裝—30mL包含250 mM Tris-HCl (pH 8.0), 750 mM NaCl, 50 mM MgCl2, 5 mM EDTA, 5% Triton X-100。
特異性識(shí)別Cdc42活性構(gòu)象的兔多克l隆抗l體（Anti-Cdc42, Rabbit Polyclonal Antibody (Catalog No.21010)）：小管裝--30ul (抗l體濃度是1mg/ml)，抗l體溶于PBS（pH 7.4）并包含有 50%的甘油。
100 X GTPγS (Catalog No. 30302) ：小管裝—100ul (10 mM) ，實(shí)驗(yàn)中0.5mL細(xì)胞裂解液使用 5ul GTPγS標(biāo)記。
100 X GDP (Catalog No. 30304) ：小管裝—100ul (100 mM) ，實(shí)驗(yàn)中0.5mL細(xì)胞裂解液使用5ul GDP標(biāo)記。
檢測(cè)步驟
Ι?；钚訡dc42 Pull-Down實(shí)驗(yàn)
1. 等分0.5-1 mL的細(xì)胞裂解物至微量離心管中。
2. 向管中加入1mL的1X Assay/Lysis 緩沖液。
3. 向管中加入1ul的活性Cdc42單克l隆抗l體。
4. 用渦旋振蕩儀將protein A/G凝膠柱充分混勻，然后快速的吸出20ul懸浮珠漿液加入離心管中。
5. 將管置于4°C條件下孵育1H，并輕輕的進(jìn)行搖動(dòng)。
6. 5000g，離心1分鐘。
7. 棄上清，這一步要非常小心以避免珠子的損失。
8. 用0.5 mL的1X Assay/Lysis緩沖液洗滌珠子三次，離心并棄去上清。
9. 后一次洗滌后，小心的移去所有的上清。
10. 用20ul的2X SDS-PAGE樣品緩沖液重懸樣品。
11. 樣品煮沸5min。
12. 5000g，離心10s。
基因符號(hào)：RAB11
說(shuō)明：抗活性Rab11小鼠單克l隆抗l體
背景：Rab系列的小GTP酶是控制膜運(yùn)輸?shù)臋C(jī)械的關(guān)鍵要素。 Rab11已顯示可控制通過(guò)回收內(nèi)體的運(yùn)輸。
免l疫原：活性Rab11的重組全長(zhǎng)蛋白
應(yīng)用范圍：IP，IHC
推薦的稀釋液：IP：1μg，用于1?2 mg總細(xì)胞蛋白
IHC：1：50?100稀釋
濃度：1 mg / ml
格式：液體
同種型：IgG2b
純度：從腹l水中純化
存儲(chǔ)緩沖區(qū)：
防腐劑：否
成分：PBS（不含Mg2 和Ca2 ），pH 7.4、150 mM NaCl，50％甘油
種屬反應(yīng)性：抗活性Rab11抗l體識(shí)別來(lái)自脊椎動(dòng)物的活性Rab11。
儲(chǔ)存條件：儲(chǔ)存于-20°C。 避免凍結(jié)/解凍周期
