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發(fā)布時(shí)間：2021-10-17 02:30
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脂質(zhì)體法
是用帶正電荷的脂質(zhì)體作載體攜帶外源基因，與帶負(fù)電荷的細(xì)胞膜融合，把外源基因?qū)爰?xì)胞。用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)化原生質(zhì)體，其毒性較電1擊法和PEG法小，且適于運(yùn)輸大分子DNA穿過質(zhì)膜。
Antonelli等（1990）用該法將基因組DNA轉(zhuǎn)入BMS玉米原生質(zhì)體，獲得轉(zhuǎn)化了的再生愈傷組織，轉(zhuǎn)化率高達(dá)8%。
脂質(zhì)體法的優(yōu)點(diǎn)是轉(zhuǎn)化受體為單個(gè)細(xì)胞，易于篩選，不易形成嵌合體，對(duì)于原生質(zhì)體再生能力好的植物品種，是非常好的轉(zhuǎn)化方法。
真核細(xì)胞同源重組法
1994 年，Graham F建立了在293細(xì)胞同源重組產(chǎn)生重組腺病毒的方法。這個(gè)方法需要2個(gè)質(zhì)粒：骨架質(zhì)粒含有腺病毒絕大部分基因組序列，但不含有包裝信號(hào)；穿梭質(zhì)粒含有ITR、包裝信號(hào)和目的基因克1隆位點(diǎn)，以及兩段與骨架質(zhì)粒有重疊的序列。將目的基因克1隆到穿梭質(zhì)粒，與骨架質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，由于這兩個(gè)質(zhì)粒的部分序列有重疊，能夠在細(xì)胞內(nèi)發(fā)生同源重組，zui終產(chǎn)生完整的載體基因組，并包裝出重組病毒顆粒。該方法曾經(jīng)被廣泛使用，推動(dòng)了腺病毒載體的發(fā)展。由于細(xì)胞內(nèi)重組效率低，某些重組事件還可能產(chǎn)生可copy病毒(RCV)，必需經(jīng)過噬斑純化才能獲得正確的克1隆化的重組病毒，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，正逐漸被其他方法替代。
腺病毒傳播特點(diǎn)
宿主范圍廣對(duì)人致病性低，腺病毒載體系統(tǒng)可廣泛用于人類及非人類蛋白的表達(dá)。腺病毒可感1染一系列哺乳動(dòng)物細(xì)胞，因此在大多哺乳動(dòng)物細(xì)胞和組織中均可用來表達(dá)重組蛋白。特別需要指出的是：腺病毒具有嗜上皮細(xì)胞性，而人類的大多數(shù)的腫1瘤就是上皮細(xì)胞來源的。另外，腺病毒的copy基因和致病基因均已相當(dāng)清楚，在人群中早已流行（70-80%成人體內(nèi)都有腺病毒的中和抗1體存在）。人類感1野1生型腺病毒后僅產(chǎn)生輕微的自限性癥狀，且病毒唑cure有效。
