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相對于弱酸性化合物而言，弱堿性化合物在陽離子交換固相萃取過程中99%的分解都是陽離子，這一弱堿性化合物所處的環境系統的 pH值必須低于其 pKa至少兩個 pH單位。洗脫時，環境體系的 pH值應高于化合物的 pKa值至少兩個 pH單位，99%的化合物此時為中性狀態，可通過適當的溶劑從陽離子交換柱中洗脫。

選擇離子交換固相萃取柱的種類：為能有效地洗脫吸附在一起的離子化合物，對于含有強離子官能團的目標化合物，一般選用弱離子交換柱；對于含有弱離子官能團的化合物，一般選用強離子交換柱。該方法可避免目標化合物與吸附劑官能團同時處于離子化狀態，使目標化合物始終保持在不能洗脫的保留狀態。

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反相式C18分離柱

C18是十八烷基碳鏈上的反相固定相的統稱。除以普通硅膠為基質外，以C18鏈為基質的高聚物小球、氧化鋁、氧化鋯等反相固定相，均可稱為C18鏈。有很多種類型的C18，常見的C18是硅膠基質，稱為 ODS,C18能夠在純水中工作，被稱為C18-AQ。

C18反相柱的固定相為非極性固定相，流動相極性大于固定相極性，常用的溶劑一般為水和甲1醇、乙1腈、四氫呋1喃、異丙1醇等與水互溶的溶劑，適合分離非極性或弱極性的化合物，其洗脫順序一般為樣品極性從高到低。

反相分離柱C18的適用范圍

C18反相分離柱廣泛應用于天然產物的提取，藥1物合成研究與開發，生物制藥等領域。若樣品極性偏大， Rf值非常接近，則不能分離正相模式；終產物要求純度98%以上，采用正相模式達不到；樣品在正相條件下存在溶解問題——不妨考慮采用反相C18模式分離。由于其填料粘合技術的成熟和良好的分離能力，C18柱已成為日常接觸分離提純研究人員zui多的反相柱。

反相式C18反相分離柱的主要參數

分離柱C18有多種參數，大致可分為四個方面：相鍵(包括修飾、封端)、填充載體(硅膠純度、填充顆粒類型、粒徑、孔徑)、柱體本身(柱效、柱內徑、柱長)和隱藏參數(比表面積、碳含量等)。小編想選擇以下幾個大家容易忽略的

反向作用機制：

反相萃取分離主要是利用固相萃取材料官能團與目標化合物碳氫鍵之間的非極性作用力。反相非極性的 SPE柱通常更適合從極性基質中提取分離出非極性和中等極性的目標化合物。

對利用非極性作用力吸附于非極性 SPE柱的目標化合物，可用氯1仿、環己1烷、乙1酸乙1酯等具有非極性的溶劑洗脫。當溶劑的洗脫強度足夠大，可以使目標化合物與吸附劑非極性基團間的范德華力不受影響時，使其在 SPE柱中順利洗脫。即使是極性更強的甲1醇，對許多化合物而言，也有足夠的非極性力量來洗脫它。有時候，單種溶劑無法完全洗脫疏水性的目標化合物，可以考慮使用二氯甲1烷：乙1酸乙1酯(1:1，體積比)。

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洗滌劑和洗脫劑的優選

反相型和正相型洗脫液的洗脫強度應分別增加和降低，但對回收率無明顯影響；

就反相模式而言，可先對目標化合物的水溶液上樣，然后以5%、10%、20%、30%、40%、50%、70%、80%、90%、的甲1醇水溶液進行洗脫，分別收集洗脫液分析，建立淋洗曲線，確定目標化合物被洗脫時的溶劑體系，淋洗液中甲1醇的含量應略低于目標化合物正好被洗脫時的溶劑體系，而洗脫液中甲1醇的含量應略高于目標化合物正好被完全洗脫時的溶劑體系；當純甲1醇無法洗脫目標化合物時，則應測試甲1醇-甲1基叔丁基1醚混合溶液的洗脫曲線；如果離子型化合物既不溶于水也不溶于甲1醇，則可在溶劑體系中添加酸或堿。

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凈水系統

鍵合相位是非極性的，碰到水C18鏈就會被排斥，導致C18 “倒伏”，色譜峰變差，保留變弱，即水相位降，所以大多數C18反相分離柱不能用純水作流動相。一般選用C18-AQ反相柱分離親水化合物，走水體系，提高保留值。

防腐鹽

單獨用酸或堿來調節流動相中的 PH值，由于分離成分的多樣性，未必能達到實驗所要求的效果。一般做法是：以緩沖鹽制備流動相。但是有些緩沖鹽會析出不易觀察的微晶：過濾后，改變流動相的組成；不過濾時，晶體會損壞管柱，也容易堵塞管道，污染檢測器。所以，在滿足實驗條件的情況下，盡量選擇不容易析出的緩沖鹽，分離結束后，一定要清洗柱子和整個分離系統，避免出現色譜性霉菌。為便于制備和處理，常選用揮發性鹽類，如銨鹽等。