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1. VASP通過調(diào)節(jié)Rab11依賴性TGF-β受體的質(zhì)膜靶向來促進(jìn)肝星狀細(xì)胞的TGF-β活化

    肝l病學(xué)第61卷，首1期，第361-374頁，2015年1月

2. Rab5活性調(diào)節(jié)GLUT4分類為胰島素反應(yīng)性和非胰島素反應(yīng)性內(nèi)體室：胰島素抵抗發(fā)展的潛在機(jī)制。

    內(nèi)分l泌學(xué)。 2014年9月; 155（9）：3315-28

將裂解液轉(zhuǎn)移到適當(dāng)大小的試管中，并置于冰上。

如果發(fā)生核裂解，則細(xì)胞裂解液可能變得非常粘稠，難以移液。 如果發(fā)生這種情況，可將裂解液通過27?號注射l器針頭3-4次以剪切基因組DNA。

通過離心10分鐘（在4°C下為12,000 x g）清除裂解物。

收集上清液并將樣品保存在冰上以備立即使用，或速凍并保存在-70°C以便將來使用。

陽性對照和陰性對照的體外GTPγS/ GDP蛋白質(zhì)上樣量

注意：體內(nèi)細(xì)胞刺激將激l活可用Arf 6的大約10％，而體外GTPγS蛋白負(fù)載將激l活A(yù)rf 6的將近90％。

1，將0.5 ml每種細(xì)胞提取物等分到兩個(gè)微量離心管中（或使用1 μg純化的Arf 6蛋白）。

2，向每個(gè)試管中加入20 μl 0.5 M EDTA（終濃度為20 mM）。

3，將5 μl 100 XGTPγS（至100 μM，終濃度）加到一個(gè)試管中（陽性對照）。

4，在第二個(gè)試管中加入5 μl 100 X GDP（至1 mM，終濃度）（陰性對照）。

5，在攪拌下將試管在30°C孵育30分鐘。

6，通過將試管放在冰上并添加32.5 μl 1 M MgCl2（至60 mM，終濃度）來停止加載。

免l疫印跡和檢測（所有步驟均在室溫下攪拌）

1.在電印跡步驟之后，將PVDF膜浸入100％甲l醇中15秒鐘，然后使其在室溫下干燥5分鐘。注意：如果使用硝l酸纖維素代替PVDF，則應(yīng)跳過此步驟。

2.在室溫下不斷攪拌下，在TBST中用5％脫脂奶粉或3％BSA封閉膜1小時(shí)。

將膜與抗Arf 6兔多克l隆抗l體在5％脫脂奶粉或3％BSA / TBST中以1：50?1000（取決于樣品中Arf 6蛋白質(zhì)的量）新鮮稀釋，孵育1-在室溫下持續(xù)攪拌2小時(shí)或過夜4oC。

3.用TBST將印跡的膜清洗3次，每次5分鐘。

4.將膜與二抗（例如山羊抗兔IgG，HRP偶聯(lián)物）一起孵育，在室溫下以恒定的比例在5％脫脂奶粉或3％BSA / TBST中以1：1000的比例新鮮稀釋。攪動。

5.用TBST將印跡的膜清洗3次，每次5分鐘。

6.使用您選擇的檢測方法，例如ECL。