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PCR實驗室的設計原則

使用實時熒光PCR儀，擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并；

采用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析儀，則標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。

PCR實驗室工作基本原則

1.進入各工作區(qū)域應當嚴格按照單一方向進行

試劑儲存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增區(qū)→ 擴增產(chǎn)物分析區(qū)。

2.各工作區(qū)域必須有明確的標記，不同工作區(qū)域內(nèi)的設備、物品不得混用。

PCR實驗室注意事項——擴增產(chǎn)物分析區(qū)

核酸擴增后產(chǎn)物的分析方法多種多樣，如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法、直接或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、Southern轉(zhuǎn)移、核酸測序方法、質(zhì)譜分析等。

實驗室的清潔應當按試劑貯存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進行。不同的實驗區(qū)域應當有其各自的清潔用具以防止交叉污染。

PCR實驗室各區(qū)功能及主要設備

樣品制備區(qū)：主要進行樣品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區(qū)主要設備有冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴等。

PCR實驗室布局

PCR實驗室原則上為試劑準備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域并設有專用走廊，各工作區(qū)域應設緩沖間，工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。

PCR實驗室裝飾

實驗室圍護結(jié)構(gòu)應牢固、氣密性好；所有陰陽角宜采用圓弧過渡；墻體內(nèi)壁光潔、不積塵、耐腐蝕、易清洗消毒；地面使用PVC卷材或環(huán)氧樹脂自流坪，材料應滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。

實驗室的氣流也應從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū)，不得逆向流動。各工作區(qū)頂部應安裝紫外燈，紫外燈的波長為254nm，每20㎡一支40W的紫外燈。

不同功能的工作區(qū)應是分隔獨立的，各工作區(qū)有明顯的標志，不能直通，如果緊密相連，需安裝物品傳遞窗。前兩區(qū)為擴增前區(qū)，后兩區(qū)為擴增后區(qū)，擴增前區(qū)與擴增后區(qū)應嚴格分開。

擴增區(qū)：主要進行DNA擴增。此外，已制備的DNA模板 (來自樣品制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑準備區(qū))制備成反應混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。本區(qū)主要設備有：擴增儀、冰箱、離心機、加樣器等。