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低溫生物菌種的篩選分離

篩選

工業發酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩，挑選具有某種能力的有用菌種。

分離

首先是從土壤或腐生植物中收集含菌樣品，用無菌水稀釋后，涂布于置有適宜細菌或霉菌生長的瓊脂培養基平皿上，并將其倒置于恒溫箱中，培養一定時間，平皿上長出的許多單個菌落（單一微生物的集落）經分別分離后即為各種純種菌株，簡稱純種，移種至試管斜面培養基上，置4℃冰箱備用。

低溫生物菌種的改良

改良

即采用遺傳育種的方法，使菌株(從自然界分離篩選而得的出發菌株)的遺傳因子 DNA發生突變、重組，從而從中選出產量高、成品質量好或具有新的培養特性如耐產物抑制、能利用廉價原料以及具有生產新品種能力的優良菌種。采用的方法有誘變育種、雜交育種、細胞融合技術和重組DNA技術。誘變育種是利用誘變因子如紫外線、鈷－60、乙烯胺類等物理或化學誘變劑處理生產菌株的單孢子懸浮液，以獲得誘發突變株。隨后進行突變株的篩選，從中篩選高產菌株。由于隨機的突變群體中，有益突變所占比例很低，要獲得高產突變株必須進行大量篩選。可根據生物合成途徑中的反應點,并通過它們的改變以提高產率或其他特性，如選育抗產物反饋抑制的突變株、增加細胞透性的突變株及營養缺陷型的突變株等。這種“理性篩選法”廣泛應用于氨基酸產生菌的選育。

低溫生物菌種——菌種分離方法介紹

孢子分離又可分為以下幾種方法：

( 1 ）褶上涂抹法：選取新鮮、健壯、未開傘、未裂破的子實體，洗凈后用75 %酒精表面滅菌2 分鐘，然后連同培養基一起放入接種箱內，經熏蒸消毒12 ～ 24 小時，再按無菌操作技術將接種環在子實體菌褶上涂抹，把涂抹后帶孢子的接種環在培養基上劃線接種，，后置于25 ～ 28 ℃恒溫箱內培養，可得純菌種。

( 2 ）孢子印采集法：取滅過菌的載玻片、試紙或黑布，置于新鮮、未開傘或未開裂的子體菌褶的下方。經24 小時后，便落下孢子，形成印痕（即孢子印）。然后，用接種環或玻璃棒蘸取孢子，接種在平面或斜面培養基上，進行恒溫培養，可得純菌種。

( 3 ）孢子收集器采集法：孢子收集器由玻璃鐘罩、培養皿、三角架、搪瓷盤等組成。鐘罩下為一搪瓷盤，直徑25 厘米左右，盤內先墊襯4～6 層紗布，中央放1 副9 厘米直徑的培養皿，大蓋口朝下，上放小的，口向上。然后，在上面小的培養皿上放1 只鉛絲繞成的三角架，再將帶孔的玻璃鐘罩蓋上，頂上罩孔用棉塞塞好，用紗布包好整個孢子收集器，置于高壓滅菌鍋或蒸籠內滅菌2小時。

孢子收集器滅菌消毒后，放入無菌室或無菌箱內。然后，用小刀割取1 塊4～5 厘米大小的子實體，插在收集器內的三角架頂上（若無孢子收集器，也可用培養皿代替）。再置于溫度24 ～26 ℃下培養24 小時，培養皿中便可見到白色粉狀物，此即為孢子。此時，可將孢子收集器再移至接種箱內，取出培養皿，蓋好，并在培養皿內加入10 ～ 20 毫升的無菌水，使孢子散于本中，成為孢子懸浮液。然后，再用無菌打針筒或吸管吸取孢子懸浮液，接種于試管斜面培養基上，每管注2 ～ 3 滴。置于24 ～ 26 ℃溫度下培養5 ～ 7 天，培養基上便可長出白色菌落。待菌落直徑有0 . 5 厘米時，選健壯的菌落，再移接于另一試管的斜面培養基上培養。當白色菌絲長滿試管時，便得純菌種。