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              發(fā)布時(shí)間:2021-07-09 10:02  

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              ELISA試劑盒的測(cè)定原理

              測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原之間的特異結(jié)合反應(yīng),所以任何的診斷劑離不開(kāi)好的原料,如抗原,酶等。以前用于測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原,而則為純化抗原動(dòng)物后獲得的多和使用雜交瘤技術(shù)得到的,而抗原或的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過(guò)各種化學(xué)合成方法制備。近年來(lái),隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或及其酶結(jié)合物等測(cè)定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑,各種新型使用的測(cè)定方法也不斷出現(xiàn)。



              ELISA試劑盒——ELISA實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則

              1、溫浴時(shí),要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,防止水分的蒸發(fā)。

              2、洗板時(shí),每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,使清洗更加徹底。倒去液體后,要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。
              3、洗液不夠時(shí),可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。
              4、底物是光敏感的,要在臨用前現(xiàn)配。
              5、檢測(cè)前,要打開(kāi)酶標(biāo),使之穩(wěn)定10分鐘以上。
              6、底物有一定的毒性,終止液對(duì)皮膚有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸。
              7、待檢樣品要澄清,否則會(huì)影響結(jié)果。
              8、溫浴時(shí)間應(yīng)遵守試劑盒規(guī)定。
              9、應(yīng)盡量做雙孔實(shí)驗(yàn),這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
              10、對(duì)結(jié)果有疑問(wèn)的樣品要用其它方法進(jìn)行確證。



              Elisa試劑盒的操作注意事項(xiàng)

              洗刷是ELISA試劑盒操作過(guò)程中決議實(shí)驗(yàn)勝敗的一個(gè)關(guān)鍵步驟。目的是除掉未結(jié)合的反響物,間斷抗原抗體反響,除掉標(biāo)本中與反響無(wú)關(guān)的成分、游離的酶標(biāo)物以及反響過(guò)程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)。

              斷定效果須運(yùn)用Elisa試劑盒測(cè)讀儀,比色法判讀可選擇單波長(zhǎng)或雙波長(zhǎng),根據(jù)反響液顏色的不同選用不同波長(zhǎng)的濾光片,以空白孔校零測(cè)定反響孔的吸光度值。具有杰出的重復(fù)性。



              Elisa試劑盒操作注意事項(xiàng)

              1.Elisa試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

              2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

              3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

              4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

              5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

              6.底物請(qǐng)避光保存。

              7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以讀數(shù)為準(zhǔn).

              8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按污染物處理。

              9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

              10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。



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