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發布時間:2020-12-25 07:43  
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注意: 1、不建議將爬片泡酸后高壓滅菌,首先玻片太薄高壓容易使玻片變形,其次濕滅很容易使玻片上留下水漬影響細胞貼壁;
2、接細胞時控制合適的細胞量,避免收樣時細胞量過度擁擠甚至打堆影響結果的觀察。
武漢邁斯普生物科技有限公司是一家專業從事生物醫學技術服務、技術咨詢及產品開發的生物技術服務企業。公司坐落于武漢光谷,由3位歸國博士領銜創辦。公司長期致力于建立并完善多項基礎生物技術服務平臺。注意事項除前面過程中附加的注意事項以外,還需注意:1、操作玻片的過程中要小心,以免玻片碎裂?,F憑借自身技術特色,依托光谷生物城技術產業優勢,面向全國提供生物技術服務。
GFP,實際是給你要研究的物質加上標記,在此相當于報告蛋白1653的作用。使用GFP必須構建融合蛋白載體,并在轉染之后有效表達。亞細胞定位要研究蛋白質的細胞定位,是在外面完成的一種實驗,不能再體內蛋白質細胞中完成,所以,研究的成本比較高,對專業知識的要求比較高。這樣,若在熒光顯微鏡下看到細胞內某一部位存回在GFP信號,說明和GFP融合的蛋白也存在于該部位,這樣就達到了確定某答物質亞細胞定位的目的。
1)將融合基因(待測植物蛋白質基因-報告基因)克隆到植物表達載體,得到重組表達載體;2)將重組表達載體轉化農,得到重組農;3)向重組農中加入農侵染緩沖液,調節OD600為0.1~0.3,20-25℃靜置1-2h,得到侵染菌液;1)將融合基因(待測植物蛋白質基因-報告基因)克隆到植物表達載體,得到重組表達載體。4)用針頭在植物葉片上避開葉脈扎孔,用無針頭將侵染菌液從扎孔處注射至植物葉片內;5)培養植物2天,從注射部位取1-2cm2葉片;根據報告基因檢測待測植物蛋白質在植物中的亞細胞定位。實驗證明,本方法具操作簡單、快速、標記效果好、重復性好的優點;還可用于基因表達調控及內含子功能研究等,對研究新基因功能和表達調控奠定了技術基礎。
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確定亞細胞定位有多種方法,其中較常見的是目的蛋白與Marker的熒光雙染,然后用熒光顯微鏡來觀察。蛋白質的亞細胞定位實驗本質上是熒光雙染技術,也可以結合生物信息學方法預測蛋白質的亞細胞定位。