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發布時間：2021-10-21 03:27
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凍存袋的基本原理
利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。 細胞凍存時向培養基中加入保護劑--終濃度5%．15%的甘油或DMSO，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結條件下，細胞內水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷。 采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min，當溫度低于-25℃時可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(-196℃)。
為什么需要凍存袋？
細胞培養的傳代及日常維持過程中，在培養器具、培養液及各種準備工作方面都需大量的耗費，而且細胞一旦離開活物開始原代培養，它的各種生物特性都將逐漸發生變化并隨著傳代次數的增加和體外環境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進行細胞凍存十分必要。細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；細胞儲存在液氮中，溫度達-196℃，理論上儲存時間是沒有限制的。
凍存袋注意事項
1.欲冷凍保存之細胞應在生長良好且存活率高之狀態，約為80~90%致密度。
冷凍前檢測細胞是否仍保有其特有性質，例如hybridoma應在冷凍保存前一至二日測試是否有antibody之產生。
2.細胞在液氮中可長期凍存沒有時間限制，而不會影響細胞活力﹔在-70度可保存數月。注意冷凍保護劑之品質。
DMSO應為試劑級等級，無菌且無色是直接購買無菌產品，以5~10m1小體積分裝，4℃避光保存，勿作多次解凍。
3.凍存細胞數量要足夠。無論再怎么小心，細胞在冷凍和復蘇過程中總會死掉一批的。所以，一開始凍存細胞的數量要足夠。一般要達到5× 10^6 /毫升，一瓶不夠兩瓶湊。但是，這個不能一概而論。有些細胞，比如雜交瘤細胞，只需要1-3x 10^6 /毫升
