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反相分離柱C18的適用范圍

C18反相分離柱廣泛應用于天然產物的提取，藥1物合成研究與開發，生物制藥等領域。若樣品極性偏大， Rf值非常接近，則不能分離正相模式；終產物要求純度98%以上，采用正相模式達不到；樣品在正相條件下存在溶解問題——不妨考慮采用反相C18模式分離。由于其填料粘合技術的成熟和良好的分離能力，C18柱已成為日常接觸分離提純研究人員zui多的反相柱。

反相式C18反相分離柱的主要參數

分離柱C18有多種參數，大致可分為四個方面：相鍵(包括修飾、封端)、填充載體(硅膠純度、填充顆粒類型、粒徑、孔徑)、柱體本身(柱效、柱內徑、柱長)和隱藏參數(比表面積、碳含量等)。小編想選擇以下幾個大家容易忽略的

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反向作用機制：

反相萃取分離主要是利用固相萃取材料官能團與目標化合物碳氫鍵之間的非極性作用力。反相非極性的 SPE柱通常更適合從極性基質中提取分離出非極性和中等極性的目標化合物。

對利用非極性作用力吸附于非極性 SPE柱的目標化合物，可用氯1仿、環己1烷、乙1酸乙1酯等具有非極性的溶劑洗脫。當溶劑的洗脫強度足夠大，可以使目標化合物與吸附劑非極性基團間的范德華力不受影響時，使其在 SPE柱中順利洗脫。即使是極性更強的甲1醇，對許多化合物而言，也有足夠的非極性力量來洗脫它。有時候，單種溶劑無法完全洗脫疏水性的目標化合物，可以考慮使用二氯甲1烷：乙1酸乙1酯(1:1，體積比)。

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洗滌劑和洗脫劑的優選

反相型和正相型洗脫液的洗脫強度應分別增加和降低，但對回收率無明顯影響；

就反相模式而言，可先對目標化合物的水溶液上樣，然后以5%、10%、20%、30%、40%、50%、70%、80%、90%、的甲1醇水溶液進行洗脫，分別收集洗脫液分析，建立淋洗曲線，確定目標化合物被洗脫時的溶劑體系，淋洗液中甲1醇的含量應略低于目標化合物正好被洗脫時的溶劑體系，而洗脫液中甲1醇的含量應略高于目標化合物正好被完全洗脫時的溶劑體系；當純甲1醇無法洗脫目標化合物時，則應測試甲1醇-甲1基叔丁基1醚混合溶液的洗脫曲線；如果離子型化合物既不溶于水也不溶于甲1醇，則可在溶劑體系中添加酸或堿。

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凈水系統

鍵合相位是非極性的，碰到水C18鏈就會被排斥，導致C18 “倒伏”，色譜峰變差，保留變弱，即水相位降，所以大多數C18反相分離柱不能用純水作流動相。一般選用C18-AQ反相柱分離親水化合物，走水體系，提高保留值。

防腐鹽

單獨用酸或堿來調節流動相中的 PH值，由于分離成分的多樣性，未必能達到實驗所要求的效果。一般做法是：以緩沖鹽制備流動相。但是有些緩沖鹽會析出不易觀察的微晶：過濾后，改變流動相的組成；不過濾時，晶體會損壞管柱，也容易堵塞管道，污染檢測器。所以，在滿足實驗條件的情況下，盡量選擇不容易析出的緩沖鹽，分離結束后，一定要清洗柱子和整個分離系統，避免出現色譜性霉菌。為便于制備和處理，常選用揮發性鹽類，如銨鹽等。

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固相萃取柱(英文，簡稱 SPE柱，或 Solid Phase extraction Cartridges，簡稱 SPE柱，簡稱 SPE柱)是一種從層析柱中提取、分離和濃縮樣品的前處理設備。本發明主要用于各種食品、農畜產品、環境和生物樣品中的樣品預處理。固相萃取技術已廣泛應用于眾多國家標準(GB/T)和工業分析標準。

固相萃取柱容是固相萃取柱內填料的吸附能力。硅膠基質固相萃取柱的容量一般為1~5 mg/100 mg，即柱容為填充量的1%~5%。粘接硅膠離子交換吸附劑的容量則用 meq/g表示，即每克填料的容量為 X毫克當量。這種填料的容量一般為0.5~1.5 meq/g。

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該方法以液-固相色譜理論為基礎，采用選擇性吸附、選擇性洗脫等方法對樣品進行富集、分離、凈化，它是液-固相物理萃取過程，也可將其近似視為簡單的色譜過程。利用液相色譜法分離選擇性吸附和選擇性洗脫 SPE原理。

通常采用的方法是使液體樣品溶液通過吸附劑，將其保留在被測物質中，然后選擇適當濃度的溶劑沖去雜質，然后用少量的溶劑對被測物質進行快速洗脫，從而實現快速分離、凈化和濃縮。

還可以選擇性地吸附干擾雜質，讓被測物質外流；或者同時吸附雜質和被測物質，再用適當的溶劑選擇性地洗脫。