UPLC常用指南

另外粒徑大小一致，可以保持分子在填料微球的擴散遷移路徑基本保持一致，相應的保留時間也一致，減少分子擴散系數，從而獲得更高的柱效。因此高度粒徑均一的單分散色譜填料既可以降低渦流擴散系數又可以減少分子擴散系數，從而提高柱效。另外粒徑越精l確、分布越窄、其柱床越穩定、反壓越低、批與批的重復性越好，越能滿足高l性能色譜分析檢測的需求。第二代多孔球型色譜填料一般是由溶膠一凝膠法 (Sol-Gel) 或是噴霧干燥法制備。這兩種方法制備的球形硅膠粒徑分布都較寬不能直接用作色譜填料，而需要經過復雜篩分分級處理去除過大或過小的硅膠微球以滿足色譜填料的需求，因此生產周期長、產率低、批與批的重復性差，且會產生大量的不合格的產品。而且填料的顆粒越細篩分工藝越困難、篩分設備也越貴。其實，即使經過篩分，其填料粒徑分布也較寬。因此如何直接制備精l確的粒徑大小和高度的粒徑均一性單分散多孔硅膠一直是該領域的技術難題和發展方向。

HILIC 色譜填料自1990年Alpert提出親水作用色譜的概念以來，其應用逐漸增多。HILIC是基于極性化合物在色譜固定相表面水層和流動相之間進行的親水分配作用達到保留的一種分離模式。在HILIC分離中，流動相中水的比例越小，則洗脫能力越弱; 反之，洗脫能力越強。化合物的極性越小，則保留越弱; 反之，則保留越強。HILIC尤其適合強極性化合物分離和分析。各種商品化親水作用色譜材料的種類日益豐富，涵蓋了氨基、二醇基、咪唑基、三氮唑基、酰胺型、糖型和兩l性離子型鍵合相，為親水作用色譜的發展和應用奠定了良好的基礎。HILIC 可以作為正相色譜的替代和反相色譜的有效補充。

其它色譜填料除了反相、正相、HILIC、手性及SEC外，硅膠還用于離子交換、疏水及親和色譜分離和分析。但由于離子交換、疏水及親和色譜填料主要用于生物分離分析，因此具有化學穩定性好，耐酸堿性寬的聚l色譜填料更具有優勢。目前市場上離子交換、疏水及親和色譜填料基本上都是基于高交聯度的多孔或無孔聚l色譜填料。硅膠色譜柱填料作為HPLC的核心,一直是色譜研究中關鍵的部分. 提高色譜填料的柱效、選擇性、峰容量和使用穩定性, 增大填料的pH 使用范圍、延長填料使用壽命, 具有多種分離模式將成為色譜填料的發展方向。  

用于色譜分離和分析的硅膠色譜填料性能要求高，需要控制其粒徑大小、均勻性、形貌、孔徑結構、比表面積、純度及功能基團等眾多參數，其中任何一個參數沒有控制好，都會影響色譜分離性能。另外色譜填料的生產還要保證批次的穩定性和重復性，即使性能再好的產品，如果無法保證批次穩定性，也就無法使用，無法商業化。因此色譜填料的制備，尤其是批量生產技術壁壘高，難度大，全球只有少數幾家公司包括瑞典的Kromasil，日本Daiso，Fuji及AGC具備大規模生產高l性能硅膠色譜填料基球的能力。分析型色譜柱及填料生產廠家比制備的多得多，主要有美國Waters、Agilent、 Phenomenex、Thermo、Supelco和日本YMC、Shodex，資l深堂等多家公司。