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低溫生物菌種——篩選模型

根據不同的篩選目的，采用不同的篩選模型。如常規篩選產生菌的方法是將土壤中分離所得的純種，在含有瓊脂培養基的平皿上培養后，用打孔器將菌塊移至含有試驗菌的瓊脂培養基上，在適宜的溫度下培養一定時間后取出，如在菌塊的周圍有透明的抑菌圈，則表明此菌種具有產生抑制試驗菌生長的抑菌物質的能力。所得菌種經過搖瓶液體發酵，選出生產能力高的菌種。另一方面對所提取的進行結構分析、藥理試驗及臨床試驗等，確為有效者，即可作為生產菌種。又如篩選脂肪酶生產菌種的方法是將分離所得的霉菌涂布于含有牛脂的瓊脂培養基上，恒溫培養一定時間，如菌落周圍出現透明圈的，則該菌具有分解脂肪的能力，進一步作搖瓶發酵測定酶活力，挑選產量高者作生產菌種的出發菌株。

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實驗室的傳代保藏過程

1. 按說明書要求復溶菌粉，轉種于適當的增菌培養基內（G1），復壯后轉接至平板上，并于適當溫度下培養適當時間，分離出單個純種菌落，此為第2代（G2）。

2. 鑒定完成后，挑取純菌落制成濃菌懸液用于制備甘油冷凍管，同時挑取純菌落轉接斜面作為工作用。此時，保藏為第2代，但工作用則為第三代。

3. 將第2代管冷凍保存，將工作用于適當溫度下培養適當時間后可用于試驗。

4. 取一支冷凍保存的G2代轉種于平板和斜面培養基上，平板上的制成冷凍保藏管第三代（G3），斜面培養基經適當溫度下培養適當時間后用作工作用（W3）。

5. 將第三代（G3）冷凍或低溫保存，將生長、轉種后的G2經滅菌處理后丟棄。

6. 當工作用代數小于5時，可直接用上一代工作用轉接下一代工作用，如W3可直接轉接為W4。

7. 按上述程序操作，直至G4轉為W5為止，需重新開啟安瓿，再重復上述操作程序、保藏和使用。

以上方法中，被分為兩類。傳代用和工作用，傳代用用于甘油冷凍管法保藏，工作用用斜面低溫保藏法保藏。

實驗證明，甘油冷凍管的有效期至少為2年，但其主要適用于細菌（需氧）、酵母菌的傳代、保藏、真菌和芽孢類細菌則需應用其它方法。

低溫生物菌種——常用菌種介紹

側孢芽孢菌

在延遲期， 短芽孢菌為革蘭氏染色陰性，菌體呈細長的桿狀；在對數生長期，為革蘭氏染色陽性，菌體成短而粗的桿狀；在靜止期，革蘭氏染色又轉為陰性，菌體成細長的桿狀，偶爾也能觀察到橢圓形的芽孢。圖1是50號菌用1%H2SO4(pH6.8)負染后的電鏡照片：菌體桿狀、周生鞭毛、大小約0.88μm×2.2μm。

作為非脊椎動物的病原菌，有關研究人員曾報道了這種細菌的殺線蟲能力，由于所報道的這些側孢短芽孢菌菌株都不產生伴孢晶體，所以這些菌株的殺線蟲毒力因子并非來自于具有特征性的伴孢晶體。然而，Smirnova TA，et al.分離到了2株能形成大的伴孢晶體的側孢短芽孢菌菌株，這兩株菌顯示出很強的殺昆蟲能力，研究證實，這種能力與菌體在形成芽孢過程中的伴孢晶體相關。有趣的是，Singer的實驗表明，一株側孢短芽孢菌的殺線活性源于一個熱穩定蛋白的毒性。所有這些研究表明，不同側孢短芽孢菌菌株擁有不同的線蟲致病因子。牛秋紅研究小組分離到的側孢短芽孢菌G4菌株具有顯著的殺線蟲功能，但其并不產生伴孢晶體。從該菌株的發酵液里提取的粗蛋白酶液在12h內能殺掉所有測試線蟲并在24h內完全降解。從側孢短芽孢菌G4菌株中純化出的絲氨酸胞外蛋白酶可水解多種底物，包括膠原和線蟲體壁，具有很強的殺線蟲能力，組織病理電鏡實驗證實這種蛋白酶嚴重破壞了線蟲體壁。而且，蛋白酶將線蟲體壁分解成為一些氨基酸或小肽，這些營養物使病原細菌更好的生長繁殖。該蛋白酶基因異源表達的菌株表現出了明顯的殺線蟲活性，重組蛋白酶在體外對線蟲體壁降解，而蛋白酶缺失菌株喪失了大部分的殺線活性，死的線蟲在生測中保持了完整的體壁，表明蛋白酶在線蟲侵染中起主要作用。

生物菌種的特點

調節生命活動，增產增收：菌群中的膠凍樣芽孢菌、側孢芽孢菌、地衣芽孢菌等有益菌可促進作物根系生長，須根增多。有益微生物菌群代謝產生的植物內源酶和植物生長調節劑經由根系進入植物體內，促進葉片光合作用，調節營養元素往果實流動，膨果增產效果明顯。與施用化肥相比，在等價投入的情況下可增產15%—30%。