您好,歡迎來到易龍商務網!
發布時間:2021-04-11 09:20  
【廣告】





原位雜交中探針的選擇
DNA探針、RNA探針和寡核苷酸探針均能通過不同的酶促分子反應進行標記。寡核苷酸探針的長度較短,因此避免了探針內部退火的問題,在雜交時的滲透能力也更好,探針與靶標的接觸這是影響原位雜交是否成功的重要因素之一。DNA探針、RNA探針在合成時需要控制探針片段長度,通常300-1000bp左右,能覆蓋到較長片段的靶核酸序列,增加檢測的靈敏度。
雜交流程
雜交液的成分主要影響了核酸雜交的復性動力學和熱穩定性。雜交液的基礎成分為:Denhardt’s溶液(Ficoll,BSA,PVP),異源核酸(如鯡精3子DNA/tRNA/競爭DNA),磷酸鈉,EDTA,SDS,鹽離子,甲酰胺和硫酸葡聚糖,以及雜交探針。不同的應用中進行雜交溫度、pH、鹽離子、甲酰胺、探針濃度等條件的優化。常用的pH范圍為6.5~7.5,較高的pH值有助于提高雜交的嚴謹性。
原位雜交組織(或細胞)化學技術簡稱原位雜交(In situ hybridization, ISH)是應用已知堿基順序并帶有標記物的核酸探針與組織細胞內待測的核酸,按堿基互補配對原則進行特異性結合,形成雜交體,然后用與標記物相應的檢測系統,通過組織化學或免3疫組織化學方法在核酸原有位置進行細胞內定位、定性和定量研究。為分子水平研究細胞內基因表達及有關細胞5因子的調控提供了有效的工具??梢暈榻M織化學與免3疫組織化學的重大突破。
原位雜交不需要從組織中提取核酸,對于組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性,并可完整地保護組織和細胞的形態,更能準確地反映出組織細胞的相互關系及功能狀態。
