低溫生物菌種的脫水存法
①沙土保存法，能產孢子的細菌、線菌及霉菌可采用此法保存,即將沙和土以3:2比例混合，經稀酸處理洗凈過篩,裝入小試管內,裝置高度為1cm;滅菌2～3次，烘干后即可將在斜面培養基上生長良好的孢子，用無菌蒸餾水2～2.5ml制成孢子懸液，吸取少許加入沙土管中，經真空抽干，外觀呈松散狀態,于4℃冰箱保存，保存期可達5～7年。
② 冷凍干燥法,將孢子懸浮液與保護劑（一般用脫脂牛奶）相混合，放在安瓿管內于-20～-30℃的乙醇浴中速凍。然后，在低溫下用真空泵抽干，并用干冰使水汽結凍，熔封安瓿管，于低溫下保存。保存期可達5～10年之久。
③ 石蠟油封存法，在斜面菌種培養物上,倒上滅菌后的石蠟油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低溫干燥處保存，此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物，保存期為一年以上。
低溫生物菌種的技術規程
1、安瓿管或凍存管的準備
用圓底硼硅玻璃制品的安瓿管，或螺旋口的塑料凍存管。注意玻璃管不能有裂紋。將凍存管或安瓿管清洗干凈，121℃下高壓滅菌15-20分鐘，備用。
2、 保護劑的準備
保護劑種類要根據微生物類別選擇。配制保護劑時，應注意其濃度，一般采用10-20%甘油。
3、 微生物保藏物的準備
微生物不同的生理狀態對存活率有影響，一般使用靜止期或成熟期培養物。
分裝時注意應在無菌條件下操作。
菌種的準備可采用下列幾種方法：
刮取培養物斜面上的孢子或菌體，與保護劑混勻后加入凍存管內；
接種液體培養基，振蕩培養后取菌懸液與保護劑混合分裝于凍存管內；
將培養物在平皿培養，形成菌落后，用無菌打孔器從平板上切取一些大小均勻的小塊（直徑約5-10毫米），真菌取菌落邊緣的菌塊，與保護劑混勻后加入凍存管內；
在小安瓿管中裝1.2-2毫升的瓊脂培養基，接種菌種，培養2-10天后，加入保護劑，待保藏。
4、 預凍
預凍時一般冷凍速度控制在以每分鐘下降1℃為好、使樣品凍結到-35℃。
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發布時間：2021-01-14 22:21
