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液相色譜

液相色譜是一類分離與分析技術，其特點是以液體作為流動相，固定相可以有多種形式，如紙、薄板和填充床等。在色譜技術發(fā)展的過程中．為了區(qū)分各種方法，根據(jù)固定相的形式產(chǎn)生了各自的命名，如紙色譜、薄層色譜和柱液相色譜。經(jīng)典液相色譜的流動相是依靠重力緩慢地流過色譜柱，因此固定相的粒度不可能太小(100μm～150μm左右)。分離后的樣品是被分級收集后再進行分析的，使得經(jīng)典液相色譜不僅分離效率低、分析速度慢，而且操作也比較復雜。

什么是制備性液相色譜

液相色譜是一種分析方法，制備色譜是一種分離純化手段。液相色譜把普通的色譜柱換成制備柱，就是制備液相色譜，兩者的區(qū)別在于一種以分析為目的，追求的是檢測精度，樣品承載量非常?。恢苽渖V以分離純化為目的，它追求的是樣品承載量，檢測精度很低，檢測只用作鑒別即可。

另外，制備色譜不僅可以用液相，還可以用氣相色譜、薄層色譜、層析柱等多種載體，目前主流的制備色譜是高速逆流色譜

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制備液相色譜特點和優(yōu)點

高壓—壓力可達150~300Kg/cm2。色譜柱每米降的壓為75 Kg/cm2以上。

高速—流速為0.1~10.0 ml/min。

高效—可達5000塔板每米。在一根柱中同時分離成份可達100種。

高靈敏度—紫外檢測器靈敏度可達0.01ng。同時消耗樣品少。

HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下優(yōu)點：

速度快—通常分析一個樣品在15~30 min，有些樣品甚至在5 min內(nèi)即可完成。

分辨率高—可選擇固定相和流動相以達到較好分離效果。

靈敏度高—紫外檢測器可達0.01ng，熒光和電化學檢測器可達0.1pg。

柱子可反復使用—用一根色譜柱可分離不同的化合物。

樣品量少，容易回收—樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。

高效液相色譜儀原理

高效液相色譜法的原理是在原始的經(jīng)典色譜法基礎上面引用氣象色譜的理論，把原來的流動性改變?yōu)楹芨邏毫蛇_到4.9′107Pa。色譜柱則是用特殊的方式用小顆粒裝填而成。造成的結(jié)果就是色譜柱的柱效遠遠高于原始的經(jīng)典液相色譜。并且它柱子使用后還能具有高度靈敏度檢測器。能夠?qū)α鞒鰜淼姆治鑫镞M行連續(xù)檢測。