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平板菌落計數法測定水中細菌總數

城市供水衛生標準有所提高，自來水中細菌菌落數不得超過80CFU/mL，任意取100mL水樣不得檢出大腸桿菌。因此，對水中的細菌數量及大腸菌群數的檢驗是保證飲用水安全和控制的有效手段，同時也是評價水質狀況的重要指標。本實驗采用平板菌落計數法測定水中細菌總數。其方法是將待測樣品經適當稀釋，涂布在平板上，經培養后在平板上形成肉眼可見的菌落。統計菌落數，根據稀釋倍數和取樣量計算出樣品中的細菌數量。

細菌總數測定自來水加樣

細菌總數測定

自來水

加樣：用無菌吸管吸取1mL水樣，注入無菌培養皿中。每個水樣重復三皿。

制平板：分別傾注約15mL已溶化并冷卻到45℃左右的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基，蓋上皿蓋，立即輕輕旋轉搖動，使水樣與培養基充分混勻，平放待凝。另取一空的無菌培養皿，傾注牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基15mL，作空白對照。

培養：平板凝固后，倒置于37℃培養箱中，培養24h。

乳糖蛋白水培養基的試管

1）自來水①初發酵：取2個裝有50mL三倍濃縮乳糖蛋白胨水培養基的三角燒瓶，各加入100mL水樣；取10支裝有5mL三倍濃縮乳糖蛋白胨水培養基的試管，各加入10mL水樣?；靹蚝?，于37℃培養24h（24h未產氣的繼續培養至48h）。②平板分離：將24h培養后產酸、產氣及48h培養后產酸、產氣的發酵管（瓶）中的菌液，分別劃線接種于伊紅美藍瓊脂平板上，于37℃培養18～24h，將符合下列特征的菌落進行涂片、革蘭氏染色和鏡檢：（a）深紫黑色、有金屬光澤；（b）紫黑色、不帶或略帶金屬光澤；（c）淡紫紅色、中心顏色較深。③酵：經涂片、染色和鏡檢后，如為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，則挑取該菌落，重新接種于普通濃度的乳糖蛋白胨水培養基試管中，每管可接種同類型菌落1～3個，于37℃培養24h，若結果是產酸又產氣，即證實有大腸菌群存在。根據初發酵試驗的陽性管（瓶）數查附表11-2，即得大腸菌群數。

多管發酵法測定水中大腸菌群的操作方法

池水、河水或湖水①稀釋水樣：將水樣稀釋成10-1與10-2。②初發酵：分別吸取1mL10-2、10-1的稀釋水樣和1mL原水樣，注入裝有10mL普通濃度乳糖蛋白胨試管中。另取10mL和100mL原水樣，分別注入裝有5mL和50mL三倍濃縮乳糖蛋白胨水培養基的試管和三角燒瓶中。③以下步驟同上述“自來水”的平板分離和酵試驗。所加水樣體積為100、10、1、0.1mL的發酵管結果；水樣體積為10、1、0.1、0.01mL的發酵管結果，即得每升水樣中的大腸菌群數。