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熒光定量PCR儀的技術原理

萊普特——熒光定量PCR儀專業(yè)供應商，我們?yōu)槟峁┮韵滦畔ⅰ?/span>

所謂real-time Q-PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基因，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程，后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在 real-time 技術的發(fā)展過程中，兩個重要的發(fā)現(xiàn)起著關鍵的作用：（1）在90年代早期，TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn)，它能降解特異性熒光記探針，因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能。（2）此后熒光雙標記探針的運用使在一密閉的反應管中能實時地監(jiān)測反應全過程。這兩個發(fā)現(xiàn)的結合以及相應的儀器和試劑的商品化發(fā)展導致real-time Q-PCR方法在研究工作中的運用。

熒光定量PCR儀Ct值的含義

每個反應管內(nèi)的熒光信號達到設定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。研究表明，每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的 對數(shù)存在線性關系，起始拷貝數(shù)越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標準品可作出標準曲線，因此只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標準曲線上計算出該樣 品的起始拷貝數(shù)。

熒光定量PCR儀的產(chǎn)前診斷應用

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到目前為止，人們對遺傳性物質(zhì)改變引起的遺傳性疾病還無法治，只能通過產(chǎn)前監(jiān)測，減少病嬰出生，以防止各類遺傳性疾病的發(fā)生，如為減少X連鎖遺傳病患兒的出生，從孕婦的外周血中分離胎兒DNA，用實時熒光定量PCR檢測其Y性別決定區(qū)基因是一種無創(chuàng)傷性的方法，易為孕婦所接受。

熒光定量PCR儀的用途

考核對乙型肝的病毒(HBV)、丙型肝的病毒(HCV) 定量分析顯示：病毒量與某些藥的關系。HCV高水平表達，干擾素治作用不敏感，而HCV低滴度，干擾素作用敏感；在治過程中，HBV-DNA的血的清含量曾有下降，隨后若再度上升或超出以前水平，則提示病毒發(fā)生變異。