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發布時間：2021-01-21 11:54
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動物組織細胞基因組DNA提取
操作步驟
1. 取新鮮或冰凍動物組織塊0.1g（0.5cm3），盡量剪碎。置于玻璃勻漿器中，加入1ml的細胞裂解緩沖液勻漿至不見組織塊，轉入1.5ml 離心管中，加入蛋白酶K
（500ug/ml）20μl，混勻。在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min，也可轉入37℃水浴12～24h，間歇振蕩離心管數次。于臺式離心機以12000 rpm離心5min，取上清液入另
一離心管中。
2.加2倍體積異，倒轉混勻后，可以看見絲狀物，用100ul 吸頭挑出，涼干，用200ul TE 重新溶解。（可進行PCR反應等，需要進一步純化的按下列步驟進行）
3.加等量的酚??振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。
4.取上層溶液至另一管，加入等體積的?，振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。
5. 取上層溶液至另一管，加入1/2體積的7.5mol/L氨加入2倍體積的無水乙醇，混勻后室溫沉淀2min ，離心12000 rpm ,10min。
6.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉。
7.用1ml 70%乙醇洗滌沉淀物1次，離心12000 rpm ， 5min。
8.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉，室溫干燥。
9.加200ul TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?C20℃保存備用。
10.吸取適量樣品于GeneQuant上檢測濃度和純度。
全轉錄組測序
全轉錄組是指特定組織或細胞在特定狀態下所有轉錄產物的總和，包括mRNA和各種noncoding RNA。我們知道生物體本身的轉錄過程是一個動態變化且十分復雜的分子作用網絡，如果只是對某個單一RNA分子的研究，有時并不能準確的發現分子作用機制。轉錄組測序（RNA-Seq）是指利用第二代高通量測序技術進行cDNA測序，快速地獲取某一物種特定qi官或組織在某一狀態下的轉錄本。而競爭性內源RNA(ceRNA)理論闡述了一種全新的轉錄調控模式：ceRNA（包括lncRNA、circRNA、mRNA、假基因等）分子能夠通過miRNA應答元件（microRNA Respe Element, MRE）競爭性地結合相同的miRNA來調節彼此的表達水平。舉個例子：miRNA會導致基因沉默現象發生，而如果lncRNA競爭性結合了miRNA，從而影響了miRNA基因沉默功能實現。
ceRNA是目前轉錄調控領域的熱點內容之一，通過全轉錄組研究能夠系統性的闡述ceRNA的分子作用機制。目前對全轉錄組簡便的方法就是構建2個測序文庫分別進行測序。如測序序列已知，可通過序列比較以星號標出差異堿基處，提高工作效率。標準的生物信息學分析能夠得到mRNA、lncRNA、circRNA、miRNA各自的研究內容，靶向調控網絡、ceRNA網絡、共表達網絡分析可以將這幾種RNA聯合起來分析，從而發現新的調控網絡模型。去除rRNA的鏈特異性文庫，含有的RNA信息含量十分豐富，通過測序和生物信息學分析能夠得到mRNA、lncRNA、circRNA的鑒定及注釋信息。不過該文庫構建時會進行片段化選擇從而濾掉了small RNA的信息，所以需要另外再構建一個small RNA文庫，進行測序分析后可以得到miRNA和其他small RNA的鑒定及注釋信息。全轉錄組測序方案路線圖如下所示：
蛋白質定量組學服務
細胞內蛋白質組豐度的動態變化對不同生命過程有重要影響。若miRNA與mRNA的結合位點不配對，則抑制mRNA的翻譯。例如在許多疾病的發生和發展進程中，常常伴隨著某些蛋白質的表達異常。目前定量蛋白質組學技術主要分為標記(label)策略和非標記的(label free)定量策略，其中標記策略又分為體內標記(如 SILAC、15N 標記)，以及體外標記(如 iTRAQ、TMT 標記) 。
傳統的基于2D雙向凝膠電泳分離的蛋白質組通常可以鑒定出約1000種蛋白，對全蛋白質組的覆蓋僅在5~10%左右，不能滿足高通量定量蛋白質表達譜分析的要求。高l效毛細管電泳法(High-performanceCapillaryElectrophoresis,HPCE)這是一-種利用窄孔熔融石英毛細管來從復合物中分離不同化學組分的技術。我們結合樣品制備與高分辨率、高靈敏度的液相色譜-質譜聯用技術，可在細胞與組織類樣品中鑒定直至多于10000個蛋白，對全蛋白質組的覆蓋>60%。結合生物信息學分析，為您構建高通量蛋白質定量表達譜。
