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發布時間：2021-10-28 07:56
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ELISA試劑盒的操作方法——雙夾心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml。在每個聚乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3. 加酶標：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標（經滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“ ”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
ELISA試劑盒的試驗原理
試劑盒是固相夾心法酶聯吸附實驗（ELISA）.已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關系。
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ELISA試劑盒檢測過程中的注意事項
ELISA實驗通用規則
Elisa試劑盒——Elisa實驗常見問題及解決方案
重復性不佳，高CV值
1 樣品不均一 加樣前充分混勻樣品，取樣確保移液位置一致；
2 包被板表面遭到破壞 洗板加樣時盡量小心，避免破壞板的包被表面
3 孔與孔之間的交叉污染 孵育后取下蓋子小心操作，避免孔與孔的污染；封板膜不能重復使用
4 加樣量不一致 樣品稀釋前應充分混勻，盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴
5 邊緣效應（外周孔顯色較中心孔深） 孵育時盡量100 rpm旋轉混勻
6 微量加樣不準確 保證微量加樣的準確性和均一性
7 不正確的洗滌 洗液準確配制；充分洗滌，靜置15秒，確定每一步的洗滌
