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發布時間:2020-07-22 11:40  
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酵母雙雜交系統的的應用是快速、直接分析已知蛋白之間的相互作用,及分離新的與已知蛋白作用的配體及其編碼基因。酵母雙雜交系統檢測蛋白之間的相互作用具有以下優點。武漢邁斯普生物科技有限公司是一家專業從事生物醫學技術服務、技術咨詢及產品開發的生物技術服務企業。另外AD融合靶蛋白如果有DNA的特異性結合,則也可單獨報告基因的表達。公司坐落于武漢光谷,由3位歸國博士領銜創辦。公司長期致力于建立并完善多項基礎生物技術服務平臺?,F憑借自身技術特色,依托光谷生物城技術產業優勢,面向全國提供的生物技術服務。
單獨的BD雖然能和啟動子結合,但是不能轉錄。而不同轉錄因子的BD和AD形成的雜合蛋白仍然具有正常的轉錄的功能。如酵母細胞的Gal4蛋白的BD與大腸的一個酸性結構域B42融合得到的雜合蛋白仍然可結合到Gal4結合位點并轉錄。
武漢邁斯普生物科技有限公司是一家專業從事生物醫學技術服務、技術咨詢及產品開發的生物技術服務企業。公司長期致力于建立并完善多項基礎生物技術服務平臺?,F憑借自身技術特色,依托光谷生物城技術產業優勢,面向全國提供的生物技術服務。
FISH:采用了已知序列的、特異性的單鏈核酸作為探針,標記了生物素或熒光素,在一定的溫度和離子濃度下通過堿基互補配對法則,使得DNA-DNA原位雜交,采用熒光法顯示,將DNA在細胞爬片、組織切片(石蠟切片or冰凍切片)的原始位置上標記出來的一種技術。武漢思特進科技發展有限公司成立于2007年,是一家以實驗技術研發、實驗產品研發、日化產品研發、實驗項目承接為一體的高新技術公司。
石蠟切片的FISH要點
(1)組織固定,采用PH7.2的10%甲醛固定24h是比較適合的,PH很重要。較厚的組織塊建議切開后再固定。這一點小編已經反復提過很多次了。良好的固定是所有病理實驗的前提。
(2)對于石蠟切片來說,采用蛋白酶K作為消化液是更優的選擇。消化條件20g/L蛋白酶K在50℃下消化20min。胃蛋白酶是極易失活的,失活了就沒法充分消化,消化過度又會使細胞核變模糊。綜合來看,小編更推薦蛋白酶K。
(3)石蠟切片的雜交溫度一般都是37攝氏度。而雜交時間則需要摸索才能得到更佳時間。不過,一般的過夜孵育基本可以達到目的。
(4)FISH實驗中非特異性著色是個難以避免的問題,我們能做的就是盡量減少背景。具體可作為的地方:充分嚴格漂洗、全程避免干片、探針濃度不宜太高、雜交溫度要控制在37℃。