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發布時間:2021-08-25 23:58  
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熒光定量PCR儀的相關介紹
PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數方式增加的,隨著反應循環數的增加,終PCR反應不再以指數方式生成模板,從而進入平臺期。在傳統的PCR 中,常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測PCR反應的終擴增產物,因此用此終點法對PCR產物定量存在不可靠之處。
在real-time Q-PCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的監測和連續地分析擴增相關的熒光信號,隨著反應時間的進行,監測到的熒光信號的變化可以繪制成一條曲 線。在PCR反應早期,產生熒光的水平不能與背景明顯地區別,而后熒光的產生進入指數期、線性期和終的平臺期,因此可以在PCR反應處于指數期的某一點 上來檢測PCR產物的量,并且由此來推斷模板當初的含量。
熒光定量PCR都有哪些用途呢?
萊普特——熒光定量PCR儀專業供應商,我們為您提供以下信息。
新診斷及檢驗試劑的開發
現有的很多診斷及檢驗方法都不能同時滿足快速、靈敏、定量的要求如現有培養法、Elisa法等等,而熒光定量PCR方法以則可以做到這一點,從而可為臨床疾病、商檢、糧油檢驗、食品檢驗、血液檢驗等等開發新的試劑,從而提高檢驗的靈敏度、速度及準確性等;這類試劑的種類是非常多的,所開發的試劑的社會效益及經濟效益都是很巨大的。
熒光定量PCR的原理
PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;剛開始時, 探針結合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。或者使用熒光染料SYBR。SYBR可以結合到雙鏈DNA上面,當體系中的模板被擴增時,SYBR可以有效結合到新合成的雙鏈上面,隨著PCR的進行,結合的SYBR染料越來越多,被儀器檢測到的熒光信號越來越強,從而達到定量的目的。