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發布時間:2021-08-01 22:02  
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熒光分光光度計
熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發光譜、發射光譜以及熒光強度、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數,從各個角度反映了分子的成鍵和結構情況。通過對這些參數的測定, 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環境下的構象變化, 從而闡明分子結構與功能之間的關系。熒光分光光度計的激發波長掃描范圍一般是190~650nm,發射波長掃描范圍是200~800nm。可用于液體、固體樣品(如凝膠條)的光譜掃描。
熒光光譜
熒光光譜包括激發譜和發射譜兩種。激發譜是熒光物質在不同波長的激發光作用下測得的某一波長處的熒光強度的變化情況,也就是不同波長的激發光的相對效率;發射譜則是某一固定波長的激發光作用下熒光強度在不同波長處的分布情況,也就是熒光中不同波長的光成分的相對強度。氣態自由原子吸收光源的特征輻射后,原子的外層電子躍遷到較高能級,然后又躍遷返回基態或較低能級,同時發射出與原激發波長相同或不同的發射即為原子熒光。原子熒光是光致發光,也是二次發光。當激發光源停止照射之后,再發射過程立即停止。
熒光光譜的壽命
熒光物質具有兩個重要的發光參數:熒光壽命和熒光產率。熒光壽命(τ)是指當激發停止后,分子的熒光強度降到激發時強度的1/e所需的時間,它表示粒子在激發態存在的平均時間,通常稱為激發態的熒光壽命。與穩態熒光提供一個平均信號不同,熒光壽命提供的是激發態分子的信息,前者可以告訴你事情發生了,而后者可以告訴你為什么發生。
熒光的主要用途
熒光光譜儀被廣泛應用于化學、環境和生物化學領域。是研究小分子與核酸相互作用的主要手段。通過與核酸相互作用,使DNA與探針鍵合的程度減小,反映在探針熒光光譜的改變,從而可以了解和核酸的作用機理。
熒光光譜儀是研究與蛋白質相互作用的常用儀器。與蛋白質相互作用后可能引起自身熒光光譜和蛋白質自身熒光(內源熒光)光譜以及同步熒光光譜的變化,如熒光強度和偏振度的改變、新熒光峰的出現等,這些均可以提供與蛋白質結合的信息。
