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發布時間:2021-10-21 03:34  
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反相模式下,溶劑體系的極性應以樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的次序遞減,并以遞增程度遞減。要確保所選擇的樣本溶劑不會洗脫目標物,所選擇的淋洗劑應在不洗脫目標物的前提下,很大限1度地洗脫干擾物,所選洗脫劑應能碰巧完全洗脫目標物。
正相位模式是 SPE小柱相的固定相極性大于流動相極性的分離模式。主要用途:
固相萃取材料極性表面與物極性官能團極性相互作用;極性力比非極性力強,但比離子力弱;常用的極性基團有羥基,胺基,巰基等。弱極化基質環境有利于形成極性力,因為弱極化溶劑不能與極性固定相形成氫鍵功能團。結果表明: SPE正相萃取后,樣品基質多為弱極性,如正己烷、二1氯甲1烷、菜油等,而目標物多含有極性官能團。
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渠道效應
當 SPE小柱填料裝實后,流速過小柱時,液體是以層流通過填料層,將填料層充分浸潤,潤濕的液面截層向上推進,見附圖;流速過大時,柱床厚度過大,可能在填料內形成溝道,液流將穿過溝道,快速通過小柱,而使填料浸潤不足,從而使得體與填料的接觸面積大大減少,嚴重影響填料對目標物質的保留性。
溶液環境的 pH如何影響化合物在柱狀物上的保持性,我們為什么要關注該化合物的 pKa值,這些因素需要放在C18柱狀物上嗎?
A:首先, Ka指酸度系數,也稱為酸離解常數,可以被理解為酸離解H離子的能力,而 pKa=- lgKa,對于酸,在環境中 pH離子的平衡如下
排氣泡注意事項
排泡時,一般排除1/3柱體體積的溶劑即可排除填充物中的氣泡,切記不可將溶液排干。防脫水,手動排氣泡速度不易過快,但也不能過慢,過慢的速度可能無法排出較大的氣泡。
要是激1活平衡液不小心排干了怎么辦?只需再加入活化溶劑,使之成為氣泡。
適當地排除氣泡可以在一定程度上避免過慢或流速不穩定的情況。那么我們的恢復,平衡性能不能得到保證?有一種神奇的小操作,就是在做完這兩個步驟后抽干,這樣我們就可以得到更好的實驗結果。
固相萃取(Solid Phase Extraction,簡稱 SPE)是20世紀70年代中期發展起來的樣品前處理技術,其用途廣泛,并日益受到人們的歡迎。按其不同的吸附填料和吸附機理,主要分為正相、反相、離子交換和混合固相萃取小柱。正相、反相固相萃取小柱主要用于萃取極性和非極性化合物,而對某些帶電物質(離子化合物)的萃取回收率較低,例如C18固相萃取小柱,當目標化合物處于離子狀態時,C18對該化合物的能力因子顯著降低。
離子化固相萃取技術適合于分解為帶電離子的化合物,其作用機制是在帶電的目標化合物離子和帶電離子相反的吸附劑之間產生靜電吸引。試樣基質可以是極性的,例如水溶液,也可以是非極性的有機溶液,但實際使用時用水溶液較多,如生物體液、江河湖海等天然水、廢水等。
在選擇C18反相分離柱時,應根據樣品情況,改變流動相的組成或溶劑強度,以提高分離度、選擇性或保留時間。
反相法C18在分離過程中,水可以與水-甲1醇、水-乙1腈、水-四氫呋1喃等多種有機溶1劑混合,而且分離效果也很好。適當的改良劑,如三乙1胺或乙1酸,可抑制硅膠表面殘余硅羥基的酸性,從而減少對酸或堿性組分的保留,并減少拖尾;同時,對流動相 PH值的調節,可大大改變酸性或堿性組分的選擇性。對酸性組分,流動相 PH<7時,增加色譜柱的保留時間;對堿性樣品,流動相 PH≥7時,將堿性組分分為游離型(RNH2),極性小,保留時間增大,可在固定相和流動相之間多次分布,提高堿性組分的選擇性。
回收率
當一個完整的 SPE操作過程中,目標化合物可能會出現在出液、淋洗、洗脫液或吸附劑中,當“目標物不能回收或回收率低”現象出現時,則向樣品溶液中加入標液,然后進行一個完整的 SPE操作,分別收集出液、淋洗液和洗脫液并進行分析。
先確定目標化合物存在于哪個部分,然后確定問題來自以下哪個環節:目標化合物不能保留在吸附劑中;沒有完全洗脫;其他環節。
目標化合物在吸附劑中保留度不足
在樣品流出液或淋洗液中發現5%以上的目標化合物時,可得出“不能保留目標化合物在吸附劑中”的結論。
2.目標化合物未完全洗脫
在樣本溶液流出液和淋洗液中沒有出現目標化合物,而在洗脫液中只出現少量或不出現目標化合物,則判斷為“目標物未完全洗脫”
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當選用柱狀規格時,必須考慮到目標化合物和在萃取條件下可能吸附的總干擾物,而不僅僅是目標化合物。另外,即使目標化合物未超過柱容量, SPE柱在保留目標化合物的同時也保留了部分干擾物,由于兩者的總量已超過柱容量,其結果必然是部分目標化合物無法保留在 SPE柱中。
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預處理溶劑和參數的選取:
確定預處理 SPE柱所用溶劑及其用量和流速,并進行平衡。在反相或離子交換柱中,通常以或極性為預處理溶液,以水或緩沖溶液為平衡溶液。
樣本過柱流速度的選擇:下一步是確定樣品通過 SPE柱流動速度。過柱流速與 SPE試樣中填充物的粒徑分布、填充物的填充密度、目標化合物與試樣基質的結合程度、試樣的粘度等因素有關。