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發布時間:2021-06-02 06:13  
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親和柱介紹
生物分子之間的親和識別包括抗體和抗原、酶和底物和受體等之間的親合作用,這些親和作用屬于生物專一性識別;此外,某些物質和生物大分子之間還有一些特異性作用,如染料和某些酶(特別是脫氫酶和激酶等),植物凝集素和糖蛋白,金屬離子和蛋白質表面的組氨酸等之間的作用,都可以應用于親和分離過程。
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親和柱的應用
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◆ 食品、飼料中真菌的測定:見相關的國家標準(如GB 5009系列的真菌測定標準方法)、其他行業標準、地方標準等。
◆ 中藥材中真菌的測定:如《中國藥典》2020版 通則2351 真菌測定法,品種正文中黃曲霉、玉米赤霉烯酮檢查項。
◆ 食品中農殘、營養成分等其他檢測項目。
親和柱的測定原理
親和柱,吸附力高柱容量大,適合于和HPLC、LC-MS及DON酶免分析試劑盒結合使用,定量檢測DON。適用于谷物、飼料等樣本中的DON凈化處理,提高了樣品的純度,純化后的提取液可用不同的分析方法測定。
測定的基礎是抗原反應,抗嘔吐毒素(DON)的連接在柱內凝膠介質上,樣品中的DON經過提取、過濾、稀釋,然后將樣品提取液緩慢通過DON親和柱,在親和柱內,DON與結合,洗滌液通過親和柱除去未被結合的雜質。之后洗脫DON,然后進行相關分析。
親和柱——親和層析的應用
抗原和利用抗原、之間高特異的親和力而進行分離的方法又稱為親和層析。例如將抗原結合于親和層析基質上,就可以從中分離其對應的。在蛋白質工程菌發酵液中所需蛋白質的濃度通常較低,用離子交換、凝膠過濾等方法都難于進行分離,而親和層析則是一種非常有效的方法。將所需蛋白質作為抗原,經動物后制備,將與適當基質偶聯形成親和吸附劑,就可以對發酵液中的所需蛋白質進行分離純化。抗原、間親和力一般比較強,其解離常數為108-10?12M,所以洗脫時是比較困難的,通常需要較強烈的洗脫條件。可以采取適當的方法如改變抗原、種類或使用類似物等來降低二者的親和力,以便于洗脫。
另外金黃色球菌蛋白A(ProteinA)能夠與球蛋白G(IgG)結合,可以用于分離各種IgG。