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發布時間：2020-12-30 08:16
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在前PCR區建立PCR混合物：
⑴可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20℃或4℃，在實驗室只涉及到擴增一種或少數幾種特異序列時這樣做很有用。
⑵如果你的實驗室使用多套引物，以致于配制包括所有試劑的單一反應混合物不夠經濟，可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。
⑶作為一個規則，應該保存一套陰性、弱陽性和強陽性對照樣品來分析樣品配制和PCR前過程的效率和潔凈程度。而且，你也希望通過使用一個已知的弱陽性樣品來驗證你的樣品緩沖液以證明里面不含擴增抑制物。
⑷陰性樣品要與每組樣品同時做，以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產物的污染，陰性對照應該包括核酸以外的所有試劑。
⑸當做陽性對照時，有兩個理由決定了應該使用很少數量的核酸。
⑹由于必須有對照反應，對照模板的特點應該予以考慮。
擴增反應混合物配制和擴增區
該區域主要進行的操作為DNA擴增。此外，已制備的DNA模板 (來自樣本制備區)的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區)制備成反應混合液等也可在本區內進行。
本區的壓力梯度要求為：相對于鄰近區域為負壓，以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應盡量減少在本區內的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行。
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對于全新的空調機組，在進氣口處安裝一個鋁制過濾網，應至少每周清潔一次。在pcr實驗室凈化中，如果絮狀物和灰塵漂浮，它們應該每周清洗兩次。在拉出鋁網之前，需要關閉新鮮空氣裝置，清潔后的過濾器只有在干燥后才能安裝。在聚合酶鏈反應純化過程中，檢查風機冷凝水管道是否堵塞，氣封中是否有積水。風扇表面冷卻器下方有一個集水盤，用于接收冷凝水，冷凝水通過帶空氣密封的管道排放到地漏處。
如果在pcr純化過程中排水冷凝管被堵塞，水將在機柜中積聚，這將導致細菌繁殖并影響純化效果。空氣密封的功能是防止排水管外的空氣通過排水管彎頭處積聚的水回流到類似于風扇中的洗滌池的水封，這可用于防止臭氣溢出。因此，在pcr實驗室的凈化過程中，當冬季沒有冷凝水時，應注意檢查氣封中積聚的水是否干燥，如果干燥，應及時加入清水，使其保持水封狀態。
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PCR實驗室各區域儀器設備配備通常如下：
1、標準的PCR實驗室試劑準備區: 儀器設備主要應有加樣器、冰箱、天平、低速離心機、混勻器、可移動紫外燈等。可使用超凈工作臺作為試劑配制操作臺面。
2、標準的PCR實驗室標本制備區儀器設備主要應有生物安全柜（為B2, 可避免提取核酸在柜內反復循環，造成標本間交叉“污染”，出現假陽性結果。
此外還應配備加樣器、臺式高速離心機（冷凍及常溫）、臺式低速離心機、恒溫設備（水浴和干浴儀）、冰箱、混勻器和可移動紫外燈等。
