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發布時間:2020-09-04 10:10  
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PCR實驗室的設計原則
使用實時熒光PCR儀,擴增區、擴增產物分析區可合并;
采用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析儀,則標本制備區、擴增區、擴增產物分析區可合并。
PCR實驗室工作基本原則
1.進入各工作區域應當嚴格按照單一方向進行
試劑儲存和準備區→標本制備區→擴增區→ 擴增產物分析區。
2.各工作區域必須有明確的標記,不同工作區域內的設備、物品不得混用。
PCR實驗室注意事項——擴增產物分析區
核酸擴增后產物的分析方法多種多樣,如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法、直接或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、Southern轉移、核酸測序方法、質譜分析等。
實驗室的清潔應當按試劑貯存和準備區→標本制備區→擴增區→擴增產物分析區的方向進行。不同的實驗區域應當有其各自的清潔用具以防止交叉污染。
PCR實驗室各區功能及主要設備
樣品制備區:主要進行樣品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區主要設備有冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴等。
PCR實驗室布局
PCR實驗室原則上為試劑準備區、樣品制備區、擴增區和擴增產物分析區四個單獨的工作區域并設有專用走廊,各工作區域應設緩沖間,工作區與緩沖間宜安裝連鎖裝置。
PCR實驗室裝飾
實驗室圍護結構應牢固、氣密性好;所有陰陽角宜采用圓弧過渡;墻體內壁光潔、不積塵、耐腐蝕、易清洗消毒;地面使用PVC卷材或環氧樹脂自流坪,材料應滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。
實驗室的氣流也應從擴增前區流向擴增后區,不得逆向流動。各工作區頂部應安裝紫外燈,紫外燈的波長為254nm,每20㎡一支40W的紫外燈。
不同功能的工作區應是分隔獨立的,各工作區有明顯的標志,不能直通,如果緊密相連,需安裝物品傳遞窗。前兩區為擴增前區,后兩區為擴增后區,擴增前區與擴增后區應嚴格分開。
擴增區:主要進行DNA擴增。此外,已制備的DNA模板 (來自樣品制備區)的加入和主反應混合液(來自試劑準備區)制備成反應混合液等也可在本區內進行。本區主要設備有:擴增儀、冰箱、離心機、加樣器等。