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水中糞大腸菌群的常見檢測(cè)方法

1、紙片法

采用紙片、紙膜、膠片等作為培養(yǎng)基載體，將特定的培養(yǎng)基和顯色物質(zhì)附著在上面，通過糞大腸菌群在上面的生長(zhǎng)、顯色來測(cè)定的方法，即糞大腸菌在紙片培養(yǎng)基上呈紅色菌落，菌落周圍產(chǎn)生黃圈是糞大腸菌分解乳糖產(chǎn)酸使指示劑變色的結(jié)果。

2、酶底物法

將加入酶底物檢測(cè)試劑的100ml水樣注入51孔或97孔的定量測(cè)量盤中進(jìn)行密封后培養(yǎng)，由于大腸菌群細(xì)菌能產(chǎn)生一種β-半乳糖苷酶分解PG使得培養(yǎng)液呈黃色，同時(shí)大腸埃希氏菌可以產(chǎn)生葡萄糖醛酸酶分解MUG，培養(yǎng)液將會(huì)在波長(zhǎng)366nm紫外光下產(chǎn)生熒光反應(yīng)。通過計(jì)算有黃色反應(yīng)和熒光反應(yīng)的孔穴數(shù)，可對(duì)照MPN表查出其代表的糞大腸菌群可能數(shù)水中糞大腸菌群。

怎樣檢測(cè)飲用水中的大腸菌群？

(一)水樣的采集

自來水取樣：應(yīng)在水龍頭打開放水5分鐘，再用無菌容器接取水樣，待分析。如水樣內(nèi)含有余氯，則采樣瓶滅菌后按每五百毫升水樣加百分之三Na2S2O3.5H2O溶液一毫升。

(二)初發(fā)酵試驗(yàn)

1.水樣稀釋：制備水樣10-1、10-2的稀釋液，方法為用無菌移液管吸取水樣10mL放于盛有90mL無菌水和若干玻璃珠的錐形瓶中，充分振蕩使混合均勻，并使其中的細(xì)菌盡量呈單個(gè)存在，即為10-1稀釋液;再?gòu)?0-1制備10-2稀釋液

2.接種和培養(yǎng)：以無菌操作于5支三倍濃縮培養(yǎng)基中各加入水樣10mL，5支普通培養(yǎng)基試管中加入水樣1mL，5支普通培養(yǎng)基試管中加入10-1稀釋液1mL，小心混勻放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。此即5管法。

3.結(jié)果觀察：37℃中培養(yǎng)24h后取出觀察，觀察有無氣體和酸產(chǎn)生。在48h之間，培養(yǎng)管內(nèi)倒置的杜漢氏小管內(nèi)有任何量的氣體積累，或培養(yǎng)基顏色從紫色變?yōu)辄S色，便可初步斷定為陽性反應(yīng)。

定量封口機(jī)廠家介紹酶底物法檢測(cè)使用方法。

基本原理

糞大腸菌群是總大腸菌群中的一部分，主要來自糞便。在44.5℃溫度下能生長(zhǎng)并發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的大腸菌群稱糞大腸桿菌。

用提高培養(yǎng)溫度的方法，造成不利于來自自然環(huán)境的大腸菌群生長(zhǎng)的條件，使培養(yǎng)出來的菌主要為來自糞便中的大腸菌群，從而更準(zhǔn)確地反映出水質(zhì)糞便污染的情況。糞大腸菌群 的測(cè)定可以用酶底物法。

方法優(yōu)勢(shì)

1.無需在無菌室內(nèi)操作。

2.手工操作時(shí)間小于1分鐘。

3.無需培養(yǎng)基制備和大量玻璃器皿滅菌。

4.24小時(shí)即可完成定性定量分析，無需驗(yàn)證試驗(yàn)

酶底物（英語：substrate）在生物化學(xué)領(lǐng)域指參與生化反應(yīng)的物質(zhì)，可為化學(xué)元素、分子或化合物，經(jīng)酶作用可形成產(chǎn)物，一個(gè)生化反應(yīng)的底物往往同時(shí)也是另一個(gè)化學(xué)反應(yīng)的產(chǎn)物。

酶底物法采用 onPG 和 MUG 兩種營(yíng)養(yǎng)指示劑，這兩種試劑分別可以被大腸菌群的 β-半乳糖苷酶和大腸桿菌的 β-葡糖醛酸酶分解代謝。當(dāng)大腸菌群在酶底物檢測(cè)試劑中生長(zhǎng)時(shí)，其使用 β-半乳糖苷酶分解代謝 ONPG，并使樣品從無色變?yōu)辄S色。大腸桿菌使用 β-葡糖醛酸酶分解代謝 MUG 時(shí)，能夠發(fā)出熒光。