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液相色譜分析的流程

由泵將儲液瓶中的溶劑吸入色譜系統，然后輸出，經流量與壓力測量之后，導入進樣器。被測物由進樣器注入，并隨流動相通過色譜柱，在柱上進行分離后進入檢測器，檢測信號由數據處理設備采集與處理，并記錄色譜圖。廢液流入廢液瓶。

遇到復雜的混合物分離（極性范圍比較寬）還可用梯度控制器作梯度洗脫。這和氣相色譜的程序升溫類似，不同的是氣相色譜改變溫度，而HPLC改變的是流動相極性，使樣品各組分在較佳條件下得以分離。

相對于氣相色譜，液相的優勢在哪里？

液相和氣相相比的優勢有很多，主要在于應用范圍更廣。氣相只限于容易氣化的低分子量物質的分析測定，對象大部分是基礎化工原材料；而任何能溶解于某溶劑的物質都能用液相分析，適用對象是分子量從幾十到幾萬的廣大范圍。在制藥、化工、環保、食品等諸多重要領域，液相都已成為主導的分析工具。也有兩者都能應用的交叉情況，但液相的制樣更簡單。液相色譜的出現克服了氣相色譜不能直接用于難揮發、熱不穩定及高分子化合物的弱點。

液相色譜儀分類

      液相色譜儀依據樣品在固定相和流動相分離過程的物理化學原理，可分為以下五種。

　　1、吸附色譜：

　　用固體吸附劑作固定相，以不同極性溶劑作流動相，依據樣品中各組分在吸附劑上吸附性能的差別來實現分離。

　　2、分配色譜：

　　用載帶在固相基體上的固定液作固定相，以不同極性溶質作流動相，依據樣品中各組分在固定液上分配性能的差別來實現分離。根據固定相和液體流動相相對極性的差別，又可分為正相分配色譜和反相分配色譜。當固定相的極性大于流動相的極性時，可稱為正相分配色譜或簡稱正相色譜;若固定相的極性小于流動相的極性時，可稱為反相分配色譜或簡稱反相色譜。

3、離子色譜：

　　用微粒離子交換劑作固定相，以具有一定pH值的緩沖溶液作流動相，依據離子型化合物中各離子組分與離子交換劑上表面帶電荷基團進行可逆性離子交換能力的差別而實現分離。

　　4、體積排阻色譜：

　　用化學惰性的多孔性凝膠作固定相，按固定相對樣品中各組分分子體積排阻滯作用的差別來實現分離。以水溶液作流動相的體積排阻色譜柱，稱為凝膠過濾色譜;以有作流動相的體積排阻色譜法，稱為凝膠滲透色譜法。

　　5、親和色譜：

　　以在不同基體上，鍵合多種不同特性的配位體作固定相，用具有不同pH值的緩沖溶液作流動相，依據生物分子與基體上鍵聯的配位體之間存在特異性親和作用能力的差別，而實現對具有生物活性的生物分子的分離。