山東高壓制備色譜系統方法來電咨詢「創新通恒」

如何用制備色譜柱制備低含量的雜質？

制備色譜柱為ZorbaxSB-C18 9.4*250mm及gilson餾分收集器，色譜儀為Agilent1100或LC-6A。想用其制備面積歸一化法含量為0.05%左右的雜質，初步提純后用高分辨的LC-MS進行定性分析。如何設定色譜條件，如，流量、進樣量、樣品的濃度、切割點的設置、是否要濃縮，要求將95%以上的主峰切除。

（主峰后有二個雜質靠得很近。）

答：

1.制備用的流動相盡量等級高一點，否則流動相中的雜質會影響LC-MS分析。

2.使用餾分收集器時，延遲體積一定要計算準確，檢測器的響應時間設到很小，否則都會影響收集的純度和回收率。制備柱的流速一般與直徑的平方成正比，如果4.6mm分析柱流速為1mL/min，9.4mm制備柱用1*（9.4/4.6）2,大約為4mL/min。進樣量設到幾個mg應該基本沒有過載。進樣樣品濃度越高越好。假如進樣10mg，理論計算0.05%的雜質大約只有5μg，顯然濃度太低，盡量是多做幾次，合并餾分然后濃縮后做LC-MS分析。

反相色譜分離后，如何快速從流動相中得到產品？

可以考慮先在低溫下，減壓旋蒸除去其中的有機的溶劑，然后用萃取的方法把產品萃取出來，然后再低溫再旋蒸，這樣，就可以不將溫度升得很高而得到產品。如果要直接蒸掉流動相，水泵的真空度要注意（要檢查氣密性），否則蒸水會很慢。一般比較好的泵在60～70度即可蒸掉水，如果泵的真空度不好，可能需要80～90度才行，這樣容易暴沸導致樣品損失。溫度太高可能引起物質變性。

制備色譜之DAC如何次次裝出高柱效

動態軸向壓縮柱（Dynamic Axial Compression Column，DAC）是工業化制備液相色譜分離的重要組成部分。當用戶填裝直徑50mm以上制備柱時，傳統預裝柱很難裝出高柱效和對稱性，另外預裝柱使用過程柱頭容易塌陷，導致柱效變差，無法滿足長期持續純化生產。DAC在運行過程中，活塞可以提供持續壓力，保證很優的填裝柱床密度和穩定性，從而長時間保持很佳分離效果。相比于預裝柱或彈簧柱，DAC可以輕松填裝和拆卸，實現不同填料反復填裝和輕松切換。有人說大柱子不用考慮柱效和對稱性，只要能分出樣品就行。現實是色譜就是靠柱效來分離的，柱效越高，分離越好，載量越大，收率和得率越高。

通常制備色譜方法開發在4.6mm，10mm或20mm的半制備柱，然后放大到DAC50或DAC100, DAC200，DAC300, DAC450, DAC600或DAC800。理論上多大規模的色譜柱都可以實現與分析柱或半制備柱同樣的效率，在現實中，設計優良的DAC柱效甚至高于預裝柱。只有柱效和對稱性類似才能保證了分離方法的線性放大。