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高效液相色譜

高效液相色譜與光譜技術(shù)聯(lián)用方法的研究也一直是色譜學(xué)科的研究熱點(diǎn)。20世紀(jì)80年代，可同時(shí)得到每個(gè)組分HPLC-UV三維譜圖的二極管陣列檢測(cè)器（DAD）問(wèn)世，對(duì)紫外-可見(jiàn)光譜的快速掃描檢測(cè)，使液相色譜能提供的信息大幅度增加，為模式識(shí)別等化學(xué)計(jì)量學(xué)中的許多手段提供了重要的應(yīng)用領(lǐng)域。90年代以后，HPLC-MS、HPLC-FTIR等色譜-光譜聯(lián)用技術(shù)逐漸成熟，為解決HPLC定性問(wèn)題提供了多種實(shí)用、有效的手段。

為適應(yīng)生命科學(xué)的發(fā)展，以制備色譜為主要對(duì)象的非線(xiàn)性色譜獲得了長(zhǎng)足的發(fā)展，人們運(yùn)用色譜法已能夠制備微量而貴重的生物活性化合物。而為了滿(mǎn)足天然產(chǎn)物分離制備、生物制藥等方面的需要，大規(guī)模的工業(yè)色譜技術(shù)、模擬移動(dòng)床色譜技術(shù)得到發(fā)展，目前，日處理量達(dá)到千克級(jí)的液相色譜系統(tǒng)已經(jīng)隨處可見(jiàn)。

高效液相色譜分析法和氣相色譜法的區(qū)別

氣相：氣相色譜是一種物理的分離方法。利用被測(cè)物質(zhì)各組分在不同兩相間分配系數(shù)(溶解度)的微小差異，當(dāng)兩相作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，這些物質(zhì)在兩相間進(jìn)行反復(fù)多次的分配使原來(lái)只有微小的性質(zhì)差異產(chǎn)生很大的效果而使不同組分得到分離。

液相：高效液相色譜法是在經(jīng)典色譜法的基礎(chǔ)上引用了氣相色譜的理論。在技術(shù)上，且流動(dòng)相改為高壓輸送；色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜(每米塔板數(shù)可達(dá)幾萬(wàn)或幾十萬(wàn))；同時(shí)，柱后連有高靈敏度的檢測(cè)器可對(duì)流出物進(jìn)行連續(xù)檢測(cè)。

應(yīng)用范圍

氣相:

分離能力好、靈敏度高、分析速度快、操作方便等。

受技術(shù)條件的限制，沸點(diǎn)太高的物質(zhì)或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)都難于應(yīng)用氣相色譜法進(jìn)行分析，一般對(duì)500℃以下不易揮發(fā)或受熱易分解的物質(zhì)部分可采用衍生化法或裂解法。

液相:

高效液相色譜法只要求試樣能制成溶液，而不需要?dú)饣虼?，不受試樣揮發(fā)性的限制。對(duì)于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、相對(duì)分子量大(大于400以上)的有機(jī)物(些物質(zhì)幾乎占有機(jī)物總數(shù)的75%~80%)原則上都可應(yīng)用高效液相色譜法來(lái)進(jìn)行分離、分析。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在已知化合物中能用氣相色譜分析的約占20%而能用液相色譜分析的約占70~80%。